安捷伦高效液相色谱仪(HPLC)的日常维护

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1、安捷伦高效液相色谱仪(HPLC)的FI常维护1、为什么溶剂和样品要过滤？溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。样品过滤头的类型：30mni内径：适用于犬进样量的过滤，由0.2Pm和0.45um两种规格,材料有纤维索，醋酸纤维,聚四氟乙烯。处理样品体积少于50u1o13mni内径：适用于范围广的过滤，由0.2um和0.4511m两种规

2、格，材料为纤维素。3mm内径：适用于小进样量的过滤,由0.2pm和0.45pm两种规格。处理样品体积为7ulo滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和滤膜类型盐，并无任何可溶物。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶液，推荐用于蛋白质和其相关样品。尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70%乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：具有蛋白吸收低，同样适用水溶性样品和有机溶剂。2、为什么IIPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项？HPLC用缓冲盐时，由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象，析出的细小盐粒非常坚硬，

3、它附着在蓝宝石活塞杆上，随着蓝宝石活塞杆的往复运动，容易产生划痕，并磨损密封垫，造成漏液等故障现象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲盐的浓度在0.lmol或大于0.lmol时,必须使用该在线冲洗选项。清洗液配制：90%水+10%异丙醇•该混合液可抑制菌类生长和减小水的表血张力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。3、为什么甌订ent1200LC的流动相管路非常细、为什么的流动相管路非常细？的流动相管路非常细在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响，由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级，液

4、体流动相的流速也比1-2气相慢1-2个数量级。因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，Agilent1200LC使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。毛细管线分类：0.17mm内径一绿色；0・12俪内径一红色。PEEK管线：内径一0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。毛细管线优点：柔韧性好.Agilent公司同时备有l/16in的粗外径毛细管线,适用于不同习惯的用户，优点是刚性好，但柔韧性差一些。4、流动

5、相使用前为什么要脱气？、流动相使用前为什么要脱气？流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体（如02）,以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产主气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。若用FLD,可能会造成荧光猝灭。常用的脱气方法比较：常用的脱气方法比较：氮气脱气法：氮气脱气法：利用液体中氮气的溶解度比空气低，连续吹氨脱气，效果较好，但成本高。加热回流法：加热回流法：效果较好，但操作复杂,且有毒性挥发污染。抽真空脱气法：易抽走有机相。抽真空脱

6、气法:超声脱气法：超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果最差。在线真空脱气法：AgilentllOOLC真空脱机利用膜渗透技术，在线脱气，智能控制，无需额外操作,成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。5、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞，以及堵塞后的处理？溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行，尤其水溶液或磷酸盐缓冲液（PH二4—7）。以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。A：请严格执行溶剂过滤。B：请勿使用多口存放的蒸饴水及磷酸盐缓冲液。C:在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续

7、吹氨气，以隔绝空气。D:避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。堵塞后的处理法方法：将过滤头从组件中取下，在浓硝酸（35%）中浸泡lh,然后用二次蒸憎水冲洗干净并超声处理。6、Agilent1200LC泵如何维护？Agilent1200LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相，及时合理的维护非常重要。A：流动相使用前请必须脱气、过滤。B：使用缓冲盐时，要加在线Seal-wash选项。C：关机前，用100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如甲醇），然后关泵，（适于反相色谱柱）。［正相色