人参皂苷20(S)-Proptopanaxadiol诱导人结肠癌细胞凋亡机制的研究

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1、１１分类号：Ｑ２９１单位代码：０８３研究生学号：２０１５３４２０５７密级：公开：⑩吉林大学硕士学位论文学术学位（）０－Ｐ人参皂苷２（Ｓ）ｒｏｐｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ诱导人结肠癌细胞凋亡机制的研究ＴｈｅＭｅｃｈａｎｉｉｓｍｏｆＣｏｌｏｎＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＡｐｏｐｔｏｓｓＩｎｄｕｃｅｄｂｙＳ－ＰＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ２０ｒｏｔｏａｎａｘａｄｉｏｌ（）ｐ作者姓名：朱虹燕专业：生物化学与分子生物学研究方向：细胞信号转导与抗癌药物研发指导教师：金英花教授培养单位：生命科学学院２０

2、１８年６月未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人均不得对本论文的全，部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则应承担侵权的法律责任。，吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。

3、本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。４学位论文作者签名Ｋ曰期：叫分年４月矢曰人参皂苷20(S)-Proptopanaxadiol诱导人结肠癌细胞凋亡机制的研究TheMechanismofColonCancerCellApoptosisInducedbyGinsenoside20(S)-Protopanaxadiol作者姓名：朱虹燕专业名称：生物化学与分子生物学指导教师：金英花教授学位类别：理学硕士答辩日期：2018年5月29日中文摘要人参皂苷20(S)-Proptopanaxadiol诱导人结肠癌细胞凋亡机制的研究结肠癌是具有致

4、命性的恶性肿瘤疾病之一，同时也是导致人类死亡的第三大病因。结肠癌发展迅速，容易迁移至周围淋巴和血管组织、肝脏等。然而，目前针对于结肠癌，手术切除的治愈率并不高，且化疗药物效果不明显。因此研发出能抑制结肠癌的小分子药物迫在眉睫。20(S)-Proptopanaxadiol（PPD）是由Rg3、Rk1等人参皂苷在大肠内被一些微生物代谢产生的微量成分，具有一定的生物活性。根据已有报道指出20(S)-PPD和其衍生物20-GPPD、2H-PPD可通过诱导细胞凋亡的方式抑制多种肿瘤细胞生长，例如：乳腺癌、肝癌、胶质细胞癌等。本论文旨在运用生物化学和细胞生物学研

5、究手段研究20(S)-PPD的诱导结肠癌细胞凋亡的信号通路，揭示其作用的分子机制，为20(S)-PPD在癌症治疗中的应用提供理论依据。主要进行了以下几方面的研究：1）运用MTT方法测定20(S)-PPD处理人结肠癌HCT-116、SW480细胞后细胞生存率情况，分析其药物活性；2）在20(S)-PPD对结肠癌HCT-116，SW480细胞有杀伤力的作用下，根据MTT的试验结果选取适宜的药物浓度和作用时间；3）通过细胞凋亡形态学的观察、流式细胞术（PI/AnnexinV-FITC双染法）、WesternBlot检测Caspase-3底物PARP断裂的情

6、况、体外Caspase-3活力的测定来验证20(S)-PPD是否可以诱导细胞凋亡；4）进一步通过检测Caspase-8、Caspase-9体外活力、线粒体膜电位分析和WesternBlot等方法来确定20(S)-PPD诱导HCT-116、SW480细胞凋亡的具体信号通路；5）运用半定量PCR方法检测外源型细胞凋亡信号通路中几种重要的死亡受体和死亡配体在转录水平上的变化，研究20(S)-PPD对膜死亡受体信号通路的影响。I综上，20(S)-PPD通过诱导人结肠癌SW480和HCT-116细胞凋亡的方式抑制结肠癌细胞生长。MTT试验结果表明20(S)-P

7、PD可有效抑制这两种癌细胞的增值，半数抑制浓度IC50值分别是3.3µg/mL和4.1µg/mL。我们通过Caspase体外活力检测、线粒体膜电位的分析、流式双染、WesternBlot等研究手段证明了20(S)-PPD既可以通过线粒体介导的内源型凋亡途径，又可以通过外源型细胞凋亡信号通路来诱导HCT-116细胞的死亡。然而20(S)-PPD只能通过线粒体途径诱导SW480细胞死亡。关键词：人参皂苷20(S)-PPD，结肠癌，细胞凋亡，死亡受体，线粒体IIAbstractTheMechanismofColonCancerCellApoptosisIn

8、ducedbyGinsenoside20(S)-ProtopanaxadiolColoncancerison