人参皂苷Rg3对小鼠肝癌细胞的凋亡作用及其活性研究

《人参皂苷Rg3对小鼠肝癌细胞的凋亡作用及其活性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、人参皂昔Rg3对小鼠肝癌细胞的凋亡作用及其活性研究人参皂昔Rg3对小鼠肝癌细胞的凋亡作用及其活性研究人参是我国传统中草药，其有效化学成分为人参皂昔人参皂。人参皂貳Rg3是从中药红参中提取的有效成分，国内外己有不少研究证实，人参皂玳Rg3具有抗肿瘤生长及转移的作用。立题依据：人参皂昔Rg3可以通过多种途径来实现促进肿瘤细胞的凋亡。人参皂昔Rg3能通过Caspase-3介导的细胞凋亡来抑制某些癌症的发生，也可以激活细胞周期素激酶抑制基因p21和p27的表达，使细胞停滞在G1期（参考文献）。实验材料：1.实验动物昆明种小鼠30只（雌雄各半），另选昆明种小鼠6只（雌雄各半

2、，供传代用），每只重约20±2go于实验前一周购进，饲养于安静、温暖、避强光的环境中，室温20±5°C,自由摄食、饮水。2.动物饲料普通颗粒饲料。3•细胞系小鼠肝癌细胞系H22,由当地实验研究所提供。4.药物人参皂试Rg3由市面上买得，纯度96%o5.主要仪器微量注射器，小鼠实验板，手术器械，真空干燥箱，6.其他抗生素药膏，安尔碘，0.5%氨水，生理盐水，微孔过滤器。实验方法：1动物分组从30只昆明种小鼠（雌雄各半）中按体重随机分为3组，分别为正常对照组（10只），肝癌模型组仃0只），人参皂貳Rg3组（10只）。2造模2.1肝癌细胞株的传代将小鼠1122肝癌细胞株

3、常规复苏、培养扩增，调整细胞悬液密度至1X106/ml,注入供传代的昆明种小鼠腹腔1ml,—周后抽取腹水，以1200r/min的速度离心5min,弃上清，保留下层糊状细胞浆备用。2.2小鼠移植性肝癌模型的制作昆明种小鼠术前禁食12h,10%水合氯醛0.35ml/100g剂量腹腔注射麻醉，仰卧位固定于手术板上，无菌条件下沿腹正中线切开lcm左右，暴露肝脏，托出肝左叶，用1ml注射器，抽取糊状细胞浆,针头与肝脏表面成30°斜刺入肝脏0.5cm,注入糊状细胞浆0.05ml,拔出针头,棉签压迫无渗血后遂层缝合关腹。2.3给药方法造模24h后开始给药，持续给药10天。正常对

4、照组生理盐水以0.2ml/只•天灌胃肝癌模型组生理盐水以0.2迅/只•天灌胃日1次;日1次;人参皂貳Rg3组人参皂貳Rg3倍以5mg/kg•d灌胃实验步骤：1.肿瘤细胞悬液制备从传代小鼠肝组织中癌性组织,加入4mlHanks液，1200r/min离心5min,重复洗涤3次后加入含10%小牛血清的DMEM(高糖)细胞培养基制成2HAC细胞悬液，调整细胞浓度至IX10°个/ml备用。2.癌细胞的接种分别取肝癌模型组和人参皂昔Rg3组10只小鼠按下法进行癌细胞接种：小鼠术前12h禁食，6h禁水，将小鼠腹腔麻醉后，取仰卧位，用橡皮筋固定四肢于实验板上，刮去腹部体毛，安尔碘

5、消毒后，剪开皮肤和腹膜，使肝左叶突出腹腔。用微量注射器抽取5PL2HAC细胞混悬液，针尖刺入小鼠肝脏注入细胞悬液，注入后拔出针头，立即用75%酒精棉签按压针孔至肝脏表面不再渗血，随即用少量粘合剂涂抹于针孔处，待干后用生理盐水冲洗曝露的肝脏表面。将肝叶送回腹腔，缝合关腹。以75%酒精擦拭切口后，涂抹一层抗生素药膏。3.人参皂昔Rg3的预处理将人参皂昔血3置于真空干燥箱(600。C)干燥至恒重，准确称取已烘干的人参皂昔50g,备用。4.注射用液的制备表一不同浓度的人参皂昔Rg3溶液12345678910人参皂昔Rg3(mg)1001502002503003504004

6、50500550生理盐水(ml)100100100100100100100100100100人参皂昔11.522.533.544.555.5Rg3浓度(mg/ml)5•动物模型的设置将三组屮的每一只小鼠称重标号，按照表二设定的溶液给正常对照组和肝癌模型组注射生理盐水，而人参皂昔超3组注射药物剂量。表二各小鼠所注射的药物量或生理盐水的量12345678910正常对照组生理盐水/ml敢爱模型组生理朴水/ml人参皂昔Rg3药物/ml实验结果及数据处理:给药10天后，采取断颈处死齐组动物，切取部分肝组织称重记录。表三各小鼠的肝脏重量12345678910正常对照组（g）肝

7、癌模型组（g）人参皂昔Rg3@）差值（g）1.将肝癌模型组和人参皂昔Rg3组切取肝肿瘤组织，纵向对比两组小鼠肿瘤组织的体积的大小；横向对比人参皂昔Rg3组切取的肿瘤组织大小，得出初步结论：人参皂昔Rg3对小鼠肝癌细胞有凋亡作用。2.绘制浓度-瘤重差曲线，确定药物与浓度之间的关系和药理相关药物浓度。研究意义：（没有作要求）从不同方向就人参皂昔Rg3抗肿瘤的作用机制进行了更深入的研究，这将有利于人参皂背Rg3在临床上更好的应用，同时对抗肿瘤新药的开发也具有重要的指导意义。