薯蓣皂苷诱导人结肠癌细胞hct-116凋亡及蛋白质组机制研究

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1、中图分类号大连医科大学——密级薯蓣皂苷诱导人结肠癌细胞HCT．116凋亡及蛋白质组机制研究InvestigatingtheapoptosisandproteomicsmechanismofdioscinagainsthumancoloncancerHCT-116cells计：学位论文：71页表格：9个插图：25幅陈浩指导教师：彭金咏教授申请学位级别：硕士学位学科(专业)：微生物与生化药学培养单位：大连医科大学药学院完成时间：二。一四年四月答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月Ft关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1．保密口，在一年

3、解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．1细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．2药品及试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯71．3实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．1细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．2MTT法测定细胞活力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．3AO／EB双荧光染色分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．4DAPI染色分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．5细胞内ROS水平测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．6细胞内Ca2+浓度测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．7细胞内NO和iNOS含量测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO2．8细胞周期检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O2

5、．9透射电镜分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．10彗星电泳分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．11TUNEL检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．12蛋白样品的制备和iTRAQ标记⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．13强阳离子交换色谱法分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．14Nano．LC．MS／MS分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．15蛋白质鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．16蛋白质组数据生物信息学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142．17Westernblot分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142．18Real．ti

6、mePCR分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯153．数据统计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161薯蓣皂苷对结肠癌细胞药效学研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．1薯蓣皂苷对六种细胞的生长抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．2薯蓣皂苷对细胞形态的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．3薯蓣皂苷对HCT-116细胞内ROS、Ca2+、NO和iNOS水平的影响⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．201．4薯蓣皂苷对HCT-116细胞超微结构的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯211．5薯蓣皂苷对HCT-116细胞周期的影响⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯221．6薯蓣皂苷诱导HCT-116细胞DNA损伤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．7薯蓣皂苷诱导HCT-116细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252薯蓣皂苷诱导HCT-116细胞系统生物学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．1蛋白组学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．2差异蛋白的分类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯392．3差异蛋白的验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯