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时间:2019-02-02
《银莲花素a诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机理的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、西南交通大学硕士研究生学位论文第l页摘要目的:研究银莲花素A在体外对人结肠癌细胞的增殖抑制作用,并探讨其诱导细胞7凋亡的分子机制。方法:用MTr测定人结肠癌细胞SW480、HCTll6和LOVO在不同药物浓度梯度的银莲花素A处理48h后细胞活性,并以O.1%DMSO作为阴性对照计算银莲花素A对细胞生长的抑制率与半数抑制浓度IC50;然后,用不同浓度梯度的银莲花素A分别处理人结肠癌细胞LOV01d、3d、5d后,绘制出LOVO细胞的生长曲线;采用PI染色法流式细胞仪检测分析不同浓度(3个浓度梯度)银莲花素A处理人结肠癌细胞LOVO(24h)后细胞周期时相分布情况;利用倒置
2、显微镜观察银莲花素A诱导人结肠癌细胞LOVO凋亡的形态变化并DAPI染色后观察其细胞凋亡的细胞核染色质变化情况;运用分光光度法测定银莲花素A处理人结肠癌细胞LOVO(24h)后caSpaSe.3活性的改变:采用赳PA裂解法提取药物处理后LOVO细胞的总蛋白经wreStemblot法检测PAI冲、Bim、P.44/42、P.ⅢK、XIAP、sun,ivin、Bcl.2、Bcl.xl和P.STAT3的活性改变和线粒体与胞浆细胞色素C的表达情况;将载有survivin基因的质粒DNA进行瞬时转染到LovO细胞中,经MTT检测细胞活性:在培养基中加入一定浓度的P.ⅢK的抑制剂S
3、Pl0065与银莲花素A后,通过MTT法测定人结肠癌细胞LOV0的活性。结果:银莲花素A明显的抑制了人结肠癌细胞SW480、HCTll6和LOVO增殖,48h半数抑制浓度IC50分别为1.783州(SW480)、1.338肛M(HCTll6)、O.156州(LOVO)(P<0.05),而且在14.00pM浓度均已经达到约90%的抑制率(P4、的比例增加明显;与对照组相比,银莲花素A作用于人结肠癌细胞LOVO明显激活PAI冲、caLspaSe.3、P.44/42、P.JNK、的活性,上调Bim、下调XIAP、surVivin、Bcl.2、Bcl.xl和P.SW盯3的表达,在胞浆中细胞色素C的表达高于线粒体中,而且差异显著;用MTT检测,经转染有suⅣivm基因的LOVO细胞的活性明显高于对照组;加入P.烈K抑制剂SPl0065后明显抑制了银莲花素A对人结肠癌细胞LOVO的凋亡。结论:银莲花素A能有效抑制人结肠癌细胞生长并诱导其凋亡,其可能是通过使肿瘤细胞阻滞在G0/Gl期,并通过激活线粒体途径和心K通路从而引5、起结肠癌细胞的凋亡。西南交通大学硕士研究生学位论文第lI页关键词银莲花素A;人结肠癌细胞;细胞凋亡;西南交通大学硕士研究生学位论文第1lI页Abstractobjective:To咖dyIhddeaninAonh啪aIlcoloncallcerceUproliferationinVi仃0,aIldtoexploreitsmolecularmechanismofinducedingapoptosis.Methods:Evaluationofcenviabil时inducedbyRaddeallinAofthedi脏rentdrugconcemration仃eatment(6、48h)t0h髓a11coloncallcercenSW480、HCT116锄dLOVObyMTTand0.1%DMSO硒anegatiVecorltrolcalculationraddea血nA0ncellgrowthinhibitionrateHalfi出bito巧conce删ionIC50;111entodⅢVLOV0ceUgromhcun,eaRerhumancoloncancercellsLOVOwere勺reatedwithadiff-erentconcentrationgradientraddeallinAin1d,3d,5d;Thecencyclepha7、sedistributionbyflowcytomet呵aIldPIstainingaRerRaddeallinAofthedi付.erentdmgconcentration(threeconcen仃ationgradient)仃eatment(24h)tohumaJlcoloncallcercellLOVO;T11emo印hologicalchaJlgesof印optosisinducedbyIⅧde撕nAtreannenttoh啪ancoloncancercellLOVOaIldapoptosisobSeⅣedchaIlgesiIl姗
4、的比例增加明显;与对照组相比,银莲花素A作用于人结肠癌细胞LOVO明显激活PAI冲、caLspaSe.3、P.44/42、P.JNK、的活性,上调Bim、下调XIAP、surVivin、Bcl.2、Bcl.xl和P.SW盯3的表达,在胞浆中细胞色素C的表达高于线粒体中,而且差异显著;用MTT检测,经转染有suⅣivm基因的LOVO细胞的活性明显高于对照组;加入P.烈K抑制剂SPl0065后明显抑制了银莲花素A对人结肠癌细胞LOVO的凋亡。结论:银莲花素A能有效抑制人结肠癌细胞生长并诱导其凋亡,其可能是通过使肿瘤细胞阻滞在G0/Gl期,并通过激活线粒体途径和心K通路从而引
5、起结肠癌细胞的凋亡。西南交通大学硕士研究生学位论文第lI页关键词银莲花素A;人结肠癌细胞;细胞凋亡;西南交通大学硕士研究生学位论文第1lI页Abstractobjective:To咖dyIhddeaninAonh啪aIlcoloncallcerceUproliferationinVi仃0,aIldtoexploreitsmolecularmechanismofinducedingapoptosis.Methods:Evaluationofcenviabil时inducedbyRaddeallinAofthedi脏rentdrugconcemration仃eatment(
6、48h)t0h髓a11coloncallcercenSW480、HCT116锄dLOVObyMTTand0.1%DMSO硒anegatiVecorltrolcalculationraddea血nA0ncellgrowthinhibitionrateHalfi出bito巧conce删ionIC50;111entodⅢVLOV0ceUgromhcun,eaRerhumancoloncancercellsLOVOwere勺reatedwithadiff-erentconcentrationgradientraddeallinAin1d,3d,5d;Thecencyclepha
7、sedistributionbyflowcytomet呵aIldPIstainingaRerRaddeallinAofthedi付.erentdmgconcentration(threeconcen仃ationgradient)仃eatment(24h)tohumaJlcoloncallcercellLOVO;T11emo印hologicalchaJlgesof印optosisinducedbyIⅧde撕nAtreannenttoh啪ancoloncancercellLOVOaIldapoptosisobSeⅣedchaIlgesiIl姗
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