银莲花素a诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机理的研究

《银莲花素a诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机理的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、西南交通大学硕士研究生学位论文第l页摘要目的：研究银莲花素A在体外对人结肠癌细胞的增殖抑制作用，并探讨其诱导细胞7凋亡的分子机制。方法：用MTr测定人结肠癌细胞SW480、HCTll6和LOVO在不同药物浓度梯度的银莲花素A处理48h后细胞活性，并以O．1％DMSO作为阴性对照计算银莲花素A对细胞生长的抑制率与半数抑制浓度IC50；然后，用不同浓度梯度的银莲花素A分别处理人结肠癌细胞LOV01d、3d、5d后，绘制出LOVO细胞的生长曲线；采用PI染色法流式细胞仪检测分析不同浓度(3个浓度梯度)银莲花素A处理人结肠癌细胞LOVO(24h)后细胞周期时相分布情况；利用倒置

2、显微镜观察银莲花素A诱导人结肠癌细胞LOVO凋亡的形态变化并DAPI染色后观察其细胞凋亡的细胞核染色质变化情况；运用分光光度法测定银莲花素A处理人结肠癌细胞LOVO(24h)后caSpaSe．3活性的改变：采用赳PA裂解法提取药物处理后LOVO细胞的总蛋白经wreStemblot法检测PAI冲、Bim、P．44／42、P．ⅢK、XIAP、sun，ivin、Bcl．2、Bcl．xl和P．STAT3的活性改变和线粒体与胞浆细胞色素C的表达情况；将载有survivin基因的质粒DNA进行瞬时转染到LovO细胞中，经MTT检测细胞活性：在培养基中加入一定浓度的P．ⅢK的抑制剂S

3、Pl0065与银莲花素A后，通过MTT法测定人结肠癌细胞LOV0的活性。结果：银莲花素A明显的抑制了人结肠癌细胞SW480、HCTll6和LOVO增殖，48h半数抑制浓度IC50分别为1．783州(SW480)、1．338肛M(HCTll6)、O．156州(LOVO)(P<0．05)，而且在14．00pM浓度均已经达到约90％的抑制率(P

4、的比例增加明显；与对照组相比，银莲花素A作用于人结肠癌细胞LOVO明显激活PAI冲、caLspaSe．3、P．44／42、P．JNK、的活性，上调Bim、下调XIAP、surVivin、Bcl．2、Bcl．xl和P．SW盯3的表达，在胞浆中细胞色素C的表达高于线粒体中，而且差异显著；用MTT检测，经转染有suⅣivm基因的LOVO细胞的活性明显高于对照组；加入P．烈K抑制剂SPl0065后明显抑制了银莲花素A对人结肠癌细胞LOVO的凋亡。结论：银莲花素A能有效抑制人结肠癌细胞生长并诱导其凋亡，其可能是通过使肿瘤细胞阻滞在G0／Gl期，并通过激活线粒体途径和心K通路从而引

5、起结肠癌细胞的凋亡。西南交通大学硕士研究生学位论文第lI页关键词银莲花素A；人结肠癌细胞；细胞凋亡；西南交通大学硕士研究生学位论文第1lI页Abstractobjective：To咖dyIhddeaninAonh啪aIlcoloncallcerceUproliferationinVi仃0，aIldtoexploreitsmolecularmechanismofinducedingapoptosis．Methods：Evaluationofcenviabil时inducedbyRaddeallinAofthedi脏rentdrugconcemration仃eatment(

6、48h)t0h髓a11coloncallcercenSW480、HCT116锄dLOVObyMTTand0．1％DMSO硒anegatiVecorltrolcalculationraddea血nA0ncellgrowthinhibitionrateHalfi出bito巧conce删ionIC50；111entodⅢVLOV0ceUgromhcun，eaRerhumancoloncancercellsLOVOwere勺reatedwithadiff-erentconcentrationgradientraddeallinAin1d，3d，5d；Thecencyclepha

7、sedistributionbyflowcytomet呵aIldPIstainingaRerRaddeallinAofthedi付．erentdmgconcentration(threeconcen仃ationgradient)仃eatment(24h)tohumaJlcoloncallcercellLOVO；T11emo印hologicalchaJlgesof印optosisinducedbyIⅧde撕nAtreannenttoh啪ancoloncancercellLOVOaIldapoptosisobSeⅣedchaIlgesiIl姗