伪人参皂苷gq对阿霉素诱导人乳腺癌细胞系mcf-7凋亡的影响作用研究

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1、伪人参皂苷GQ对阿霉素诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的影响作用研究StudyontheInfluenceofDoxorubicinCytotoxicitybyPseudo-GinsenosideGQinMCF-7HumanBreastCancerCells作者姓名：任梦薇领域（方向）：肿瘤治疗学指导教师：徐文教授类别：临床医学硕士答辩日期：2015年5月20日内容提要乳腺癌是目前世界上对女性健康造成极大威胁的常见恶性肿瘤之一，其治疗目前通常采取多学科协作、综合治疗，包括手术治疗、化学治疗、放射治疗、靶向治疗及内分泌治疗等等各种不同治疗手段。其中化学治

2、疗在乳腺肿瘤的综合治疗中具有举足轻重的作用，而以阿霉素为代表的蒽环类药物则是乳腺癌化疗方案中不可或缺的重要组成部分。但蒽环类药物随着治疗周期的延长以及应用累积剂量的逐渐增加，容易出现逐渐加重、甚至不可逆的心肌毒性。针对蒽环类药物所致的心肌损伤，目前仍没有非常有效的心肌保护性药物。伪人参皂苷GQ（PGQ）作为一个通过改变20（S）-人参皂苷Rg3结构所得的新奥克梯隆型皂苷，具有负性肌力作用，并具有一定的抗心肌缺血作用，对应用阿霉素导致的急性心肌损害和慢性心力衰竭均有一定的保护作用。本研究通过培养人乳腺癌细胞系MCF-7，应用不同浓度的伪人参皂苷（PGQ）

3、及阿霉素作用于细胞系后，使用四唑盐比色试验（MTT法）检测抑制率，用流式细胞术检测细胞凋亡情况，旨在研究伪人参皂苷（PGQ）对阿霉素诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡作用的影响。研究结果表明，阿霉素及大剂量、高浓度的PGQ单药作用于人乳腺癌细胞系MCF-7时，均可产生一定程度上的增殖抑制作用。心脏保护剂量浓度的PGQ其单独使用及其与阿霉素联用均未促进人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖，不拮抗阿霉素抗肿瘤效果。伪人参皂苷GQ可能成为蒽环类抗肿瘤药物所致心肌损伤的一种新型的心肌保护剂。摘要目的：通过培养人乳腺癌细胞系MCF-7，应用不同浓度的伪人参皂苷GQ（PG

4、Q）作用于细胞系、心肌保护剂量的PGQ与阿霉素联合与单独阿霉素作用于细胞系比较，观察细胞形态，并使用MTT法检测抑制率，用流式细胞术检测细胞凋亡，旨在了解人乳腺癌细胞系MCF-7的生长趋势并绘制其生长曲线，了解阿霉素单药对人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖抑制作用和促肿瘤细胞凋亡作用情况，了解不同浓度及剂量的PGQ及心肌保护剂量PGQ联合阿霉素对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖和凋亡的影响，从而了解PGQ对人乳腺癌细胞系MCF-7的作用情况。方法：1.细胞形态学的观察：常规培养人乳腺癌细胞系MCF-7，应用倒置光学显微镜，观察正常生长的细胞形态及阿霉素、PGQ

5、作用于细胞后的形态变化。2.绘制人乳腺癌细胞系MCF-7的生长曲线：常规培养人乳腺癌癌细胞系MCF-7，取对数生长期细胞，充分消化并制备细胞悬液，计数后以14×10每孔平均接种于96孔板，每组设复孔3个，共分为14组。之后常规培养细胞，每日对一组细胞应用MTT法在酶标免疫测定仪570nm处测吸光度，并取平均值。以培养时间为横坐标，每日测定的吸光度为纵坐标，绘制人乳腺癌细胞系MCF-7的生长曲线。3.MTT比色法分析PGQ及阿霉素对MCF-7细胞的作用4常规收集对数期生长细胞，调整细胞浓度为4×10/mL，100μL每孔接种于96孔板，培养过夜，待细胞完

6、全贴壁后加入不同浓度的药物共100μL：高浓度PGQ单药组设6个浓度梯度，分别为1250μmol/L、1000μImol/L、750μmol/L、500μmol/L、250μmol/L、125μmol/L。根据前期动物实验获得的PGQ最佳心肌保护剂量及细胞预实验结果，设立低浓度PGQ单药组，设6个浓度梯度，分别为125μmol/L、100μmol/L、75μmol/L、50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L。阿霉素单药组设6个浓度梯度，分别为20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、2.5μmol/L、1.25μmol/L、

7、0.625μmol/L。每种浓度设3个复孔，并设空白对照组、阴性对照组，每孔终体积为200μL。分别常规培养24h、48h及72h后，每孔内加入20μL5mg/L的四甲基偶氮硅盐（MTT）溶液，孵育4h，待蓝紫色结晶形成完全后，小心弃去上清，每孔加入二甲基亚矾（DMSO）150μL，震荡10分钟使结晶充分溶解，在酶标免疫测定仪570nm下测定每孔吸光值，计算不同浓度的PGQ及阿霉素对MCF-7细胞的抑制率，计算公式如下：增殖抑制率=1-（加药孔A值-空白对照孔A值）/（阴性对照孔A值-空白对照孔A值）。实验重复3次。根据阿霉素单药及PGQ单药实验结果设

8、置阿霉素浓度梯度为1μmol/L、0.5μmol/L及0.25μmol/L，联合应用100μm