20_s_人参皂苷rh_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响

《20_s_人参皂苷rh_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、20_S_人参皂苷Rh_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响李秋影炎璐璐马晓慧张莉华张兰兰郭治昕（1.天津中医药大学，天津300193；2.天津天士力研究院药理毒理所，天津3004410）摘要：目的研究20（S）-人参皂苷Rh2对人结肠癌Cacao--2和HT-29细胞增殖及周期的影响。方法采用荧光微孔法测定20（s）--人参皂苷Rh2对人结肠癌Cacao-2、HT-29细胞增殖的影响：利用显微镜观察给药后HT-29细胞形态变化：流式细胞术分析20（s）-人参皂苷Rh2对HT-29细胞周期分布的影响。结果20（S）-人参皂苷Rh2对Caco-2、HT-29细胞生长有抑制作用，并呈剂量依赖

2、性：20（S）-人参皂苷Rh2作用48h后，对HT-29、Caco-2细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为19.68、26.79μg/ml；流式细胞分析结果现实，与对照组细胞相比，20（S）-人参皂苷Rh2能显著减少HT-29细胞的G0/G1期和G2/M期细胞比例，增加D期细胞比例。结论20（S）-人参皂苷Rh2可抑制人结肠癌细胞增殖，主要原因是阻滞细胞处于S期关键词：20（S）-人参皂苷Rh2：HT-29：Caco-2：细胞增殖：细胞周期中图分类号：R996文献标识码：A文章编号：1001-1528（2001）11-1874-05人身为五加科人参属植物人参PanaxginsengC

3、.A.meyer的干燥根，是已有几千年应用历史的名贵中药。现代医学研究表明，人参中包含有机酸、维生素、糖类、无机盐、固醇、寡肽、多糖、挥发油类和人参皂苷等多种成分，具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性。人参皂苷Rh2作为人参中一类主要生物活性成分，在癌症的治疗方面具有较强的活性，其中一人参皂苷-Rg3为主要成分的抗癌新药参一胶囊已作为中药一类新药上市。大量研究表明，人参皂苷Rh2也同样具有较好的抗癌活性，如通过抑制端粒酶活性从而诱导肝癌SMMC-7721细胞分化、通过介导细胞内Caspase一类半肽氨酸蛋白酶进行信号传导进而诱导人黑色素肿瘤细胞A375-S2细胞的增殖并诱导凋亡以

4、及逆转耐药的白血病细胞等。药代动力学研究表明，人参皂苷-Rh2主要在肝、胃肠道分布；并通过线粒体途径包括P53、CASP5等多靶点诱导结肠癌SW480细胞凋亡，国内也有文献初步报道人参皂苷Rh2可抑制人结肠癌细胞株SW620和LOVO生长。从结构上，人参皂苷Rh2可分为S型和R型的构象，其中20（S）-人参皂苷Rh2单体（20（S）-G-Rh2）是植物中分离的主要构型。但20（S）-G-Rh2单体对人结肠癌细胞Ht-29和Caco-2的影响目前还未见报道。本研究旨在观察20（S）-G-Rh2对人结肠癌Caco-2和Ht-29细胞增殖及对周期的影响，以期为新药研发和临床治疗结肠癌提供理

5、论依据。1材料和仪器20（s）-G-Rh2（天津天士力药物研究院现代中药研究所，纯度为90%）：DMEM培养基（GIBCO-BRL公司）；胎牛血清（G1BCO-BRL公司）；二乙酸荧光素FlouresceinDiacetate,FDA（Sigma）；CellCy-clePhaseDeterminationKit（CaymanChemicalCom-pany）；流失细胞仪FACSCcalibur（BechmanDickson公司）；Caco-2、HT-29细胞由西河医科大学基础医学细胞中心引进，由本实验室传代培养；2方法2.1细胞培养于传代将HT-29和Caco-2细胞至于37℃，饱和

6、湿度5%CO2培养箱中常规培养，均用含10%热灭活胎牛血清，1%的抗生素（青霉素100mg/L和链霉素100mg/;）的DMEM完全培养基。细胞呈单层生长，达80%左右融合时，采用0.25%的胰酶和0.02%EDTA（1：1）混合消化液（胰酶）消化传代，取生长对数期的细胞用于实验。2.2荧光微孔法监测细胞增殖实验将对数生长期的HT-29、Caco-2细胞，用胰酶消化，用DMEM完全培养基配成单个细胞悬液，调整细胞浓度为5×104个/mL。接种于96孔培养板中，每孔接种100μL，于37℃，饱和湿度5%CO2培养箱中培养24h后换液，空白对照组为DMEM培养基，实验组每孔加入50-12

7、.5μg/mL5个浓度的20（2）-G-Rh2（用DMEM培养基配置）处理48h，每个浓度组及对照组君左3个平行孔。48h后吸弃板中培养基，加入100μL含2.5μg/mL二乙酸荧光素的PBS重复洗2变，甩去PBS并吸弃板中剩余的PBS，LeicaDM16000B电动倒置荧光相对显微镜在激发和发射波长分别为488nm和530nm下，测定每孔的荧光强度。根据荧光强度计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率，并求算出半数抑制浓度（IC50），实验重复3次。细胞生长抑制率