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《杜仲橡胶颗粒结合蛋白的分离_纯化及抗体制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、王敏杰收稿日期：2001・10-10-韩玉珍基金项目：国家自然科学基金(3987034)和农业生物技术国家实验室开放课题基金(991004-2)资助。刘卫平I)2)3)4)§)为作者排序。韩玉珍为通讯作者。傅永福5(中国农业大学生物学院植物生理学与生物化学国家重点实验室北京100094)赵德刚°(贵州大学农业生物工程垂点实验室贵阳550025)摘要：采用重复漂洗门离心法分离纯化了杜仲橡胶颗粒，SD&PAGE分析发现杜仲橡胶颗粒含有十几种蛋白，其中以56ku30ku2种蛋白的丰度较高，分别称之为EU
2、RPP56和EuRPP.,。对杜仲雌雄株的比较表明，村仲雌株叶片雌株树皮及果皮中橡胶颗粒蛋白均是EuRPfto含最高于EuRPPw,而雄株叶片雄株树皮中正柜反。进一步分离纯化了杜仲橡胶颗粒中丰度较高的30ku蛋白，并制备了该蛋白的抗体。免疫细胞化学分柄结果表明，在叶片的含胶细胞中有阳性反应，而其它细胞无阳性反应。以上工作为研究杜仲胶粒结合蛋白功能以及阐明杜仲胶生物合成机制奠定基础。笑键词：杜仲，橡胶颗粒结合蛋口，抗体制备ISOLATION,PURIFICATIONAM)ANTI©YRAISINGO
3、FRUBBERPARTICLEBINDINGPROTEINSFROMEUCOMMIAULMOIDESWangMnjienHanYuzhen2)LiuWeiping3)FuY)n^u5)(State阻Laboratory(fPlantPhy^si^offyandBiaiiemistry,CollegeBiolofficalScietK'es,ChinaAfjrici山uro!(7?uvm/7y血帀加g100094)ZhaoDegang4}(AgricuhuralHi(engineeringKeyLa
4、boratory,(ktizhouUniwmilyGfiycmg55()O25)Abstract:RubberparticleswereisolatedfromEucommiaulmoidesbyrepeatedcentrifugingandwashing・TheresultsofSDS-PACEanalysisshowedthatmorethan10proteinsassociatedwithE.ubuoidesrubberparticles,amangwhich56kiand30kuprote
5、inswerennreinabundance,wenamedthemEuRPP>6andEuRPPy)・Theexpressionofrubberparticlepm；teinswasnotthesameinmaleandfemale・InfemaleEuRPP«)wasnnreabundantthanEuRPP>6,whileinmale,EuRP^wasmoreabundantthanEuRPPio.EuRPP^owaspreparedandpurified・Weraisedtheantibo
6、dyagainstEuRPB()・Inunumofluorecentexperimentsshowedthatthegutta-containingcellscouldbestained・ThesevvorkslaidthefbundalionforstudyingthefunctionoftherubberparticlebindingpmteinsaswellaspmbingintothemechanismofE.uhnoidesrubberbiosynthe2sis.Keywords:Euc
7、ommiauhnoides,Rubberparticlebindingprotein,Antibodyraising杜仲(Eucommia讪"旅心)是我国传统的药用植物,也是最具开发前景的温带胶源植物。与巴西橡胶树(Heveabrcisiliemis)，银胶菊(Partheniumaiyentatubn)等积累的顺式-聚-1,4-异戊二烯天然橡胶不同，杜仲胶积累的是反式•聚・1,4・异戊二烯，是天然橡胶的同分异构体。由于结构上的高度有序性以往杜仲胶只能作为硬橡胶使用，而严瑞芳(1992)发明杜仲胶
8、的硫化工艺后，极大地拓宽了杜仲胶的应用价值。在大部分含胶植物中，如巴西橡胶树，主要在树皮韧皮部的具网络结构的乳汁管中合成橡胶，切暫后可分泌出胶乳，胶乳中含有大量包裹有几个到上千个橡胶分子的橡胶颗粒(Dickinson,1969)。银胶乗胶粒在树皮组织普通的薄壁细胞中积累(Cbmish刃冰，1990)。橡胶颗粒是一类不连续的亚细胞结构，橡胶分子形成疏水核心，外面由脂类和蛋白质组成的“半单位膜”包裹(Sileretal.,1997)。杜仲胶以橡胶颗粒的形式积累在含胶细胞中。杜仲的根茎叶
