小鼠 OC-STAMP 蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定.pdf

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1、·３４１２·中华临床医师杂志（电子版）２０１３年４月第７卷第８期ＣｈｉｎＪＣｌｉｎｉｃｉａｎｓ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ），Ａｐｒｉｌ１５，２０１３，Ｖｏｌ．７，Ｎｏ．８·基础论著·小鼠ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定胡其娴马晓文胡小磊沈琼娜王晶陈凤玲【摘要】　目的ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ蛋白是一种功能尚不明确的六次跨膜蛋白，通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础。方法采用ＰＣＲ技术扩增出目的基因，将其克隆到ｐＧＥＸ唱４Ｔ唱１原核表达载体中。经ＩＰＴＧ诱导后，重组质粒ｐＧＥＸ唱４Ｔ唱１／ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ表达含重组谷胱甘肽转移酶

2、（ＧＳＴ）的融合蛋白ＧＳＴ唱ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ。ＧＳＴ唱ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ融合蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。此后应用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法鉴定该抗体。结果ｐＧＥＸ唱４Ｔ唱１／ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ重组质粒构建成功，并通过原核表达获得达到免疫要求的融合蛋白。免疫所得抗体血清经间接ＥＬＩＳＡ法、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测，确定获得了高效价的小鼠ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ多克隆抗体。结论成功制备了小鼠ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ抗体，为进一步研究基因功能奠定了基础。【关键词】　小鼠ＯＣ唱ＳＴＡＭＰ；　ＧＳＴ融合蛋白；　多克隆抗体Expressionpuri

3、ficationpreparationandcharacterizationofantibodyofmouseOC唱STAMPHUQi唱xian，MAXiao唱wen，HUXiao唱lei，SHENQiong唱na，WANGJing，CHENFeng唱ling．DepartmentofEndocrinology，No．3People′sHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine，Shanghai201900，ChinaCorrespondingauthor：CHENFe

4、ng唱ling，Email：CFL1993＠126．com【Abstract】　ObjectiveＴｏｐｒｅｐａｒｅｔｈｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｏｆａｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎｍｏｕｓｅＯＣ唱ＳＴＡＭＰｗｈｏｓｅｆｕｎｃｔｉｏｎｉｓｕｎｃｌｅａｒｆｏｒｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎｓｔｕｄｙ．MethodsＴａｒｇｅｔｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲａｎｄｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＧＥＸ唱４Ｔ唱１，ｓｏｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅ

5、ｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＧＥＸ唱４Ｔ唱１／ＯＣ唱ＳＴＡＭＰｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎＧＳＴ唱ＯＣ唱ＳＴＡＭＰｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈＩＰＴＧ．Ａｆｔｅｒｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＧＳＴ唱ＯＣ唱ＳＴＡＭＰｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｕｓｅｄｔｏｉｍｍｕｎｉｚｅＮｅｗＺｅａｌａｎｄｒａｂｂｉｔｓｔｏｐｒｅｐａｒｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｔｈｅｒｅａｆｔｅｒ，ｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＥＬＩＳＡａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Results

6、ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄＧＳＴｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｆｏｒｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄ．Ａｆｔｅｒｉｍｍｕｎｉｎｇ，ｔｈｅｍｏｕｓｅＯＣ唱ＳＴＡＭＰｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗｈｉｃｈｗｅｇｏｔｗａｓｔｅｓｔｅｄｗｉｔｈｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｍａｋｅｓｕｒｅｔｈａｔｓｐｅｃｉｆｉｃｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗａｓｇｅｎｅｒａｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．ConclusionsＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎ

7、ｏｆｍｏｕｓｅＯＣ唱ＳＴＡＭＰｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ，ｗｈｉｃｈｌａｉｄｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｏｆｍｏｕｓｅＯＣ唱ＳＴＡＭＰｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅ．【Keywords】　ＭｏｕｓｅＯＣ唱ＳＴＡＭＰ；　ＧＳＴｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ；　ＰｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙＯｓｔｅｏｃｌａｓｔｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ（ＯＣ唱染色体上，与大鼠和人的同源性分别为８４％和７４％，［１］ＳＴＡＭＰ）是Ｙａｎｇ等于２００８年在经核因子κＢ受体活相似性

8、为９２％和８６％。该基因结构上高度保守，蛋白化因子配体（ｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒ