HPLC测定大黄素含量的总结

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1、HPLC测定大黄素含量的总结一、仪器和试药Agilent1100型高效液相色谱仪、Agilent化学工作站、HT-230A柱温箱、大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号为：110756-200110）、大黄素样品（****生化有限公司生产）、甲醇（分析纯和色谱纯两种）、磷酸（分析纯）、蒸馏水（自制二次蒸馏水）二、方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：AgilentTC-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）流动相：甲醇：0.6%磷酸溶液（75：25）流速：1ml/min柱温：35℃进样量：10μl检测波长：254nm在此色谱条件下，大黄素对照品、供试品溶液、阴性对照品

2、的色谱图如下：2.2方法考察阴性对照品试验：按制备方法制备不含大黄素的对照品依法测定，其他成分不干扰大黄素的含量测定。线性关系试验：精密称取大黄素对照品用甲醇制成0.1mg/ml的对照品贮备液，分别精密量取该溶液1.0ml；2.0ml；3.0ml；4.0ml；5.0ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸10μl注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积为纵坐标、进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：Y=8.7797×10e5－12.9303r=0.9997Res=0.48%线性范围：0.05~0.2μg/ml(n=5)精密度试验：同一浓度对照品溶液重复进样5次，其结果为98

3、.44%；99.03%；98.18%；99.23%；98.0%；Ksv=0.54%,表明精密度良好。稳定性试验：取同一供试品溶液，在室温下分别放置0h；2h；8h；16h；24h后进样，测定大黄素峰面积值无明显变化，RSD=0.65%(n=5)重现性试验：取同一样品，精密称定，按照样品含量测定方法重复测定5次，求得含量的RSD=0.75%(n=5)加样回收率试验：精密量取大黄素已测知含量的样品溶液，精密加入大黄素对照品溶液，混匀进样，记录色谱图，计算回收率，结果见表1：表1：大黄素加样回收率试验结果样品含量（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）RSD=0.85%0.9750.

4、081.07098.60.9750.161.13899.70.9750.241.204100.90.9750.481.46299.50.9750.961.95799.8一、讨论比较了不同比例的甲醇：0.6%磷酸溶液及乙腈：0.1%磷酸等流动相，即如果采用文中的流动相时大黄素的峰形、保留时间相当理想，且无干扰峰出现。