hplc法测定血脂灵胶囊中大黄素的含量

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1、HPLC法测定血脂灵胶囊中大黄素的含量1、仪器与试药1.1、仪器高效液相色谱仪（日本岛津公司）：LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器，CTO-10S柱温箱，H-packVP-ODSC18柱（150×4.6mm，5μg）；流动相：甲醇：0.1%磷酸溶液（85：15）；流速：0.8ml/min；检测波长：254nm，柱温：30℃；进样量：20μl。2.2、系统适用性实验2.2.1、理论塔板数（N）取大黄素对照品溶液适量，注入液相色谱仪，测定，结果大黄素对照品N=7228，因此，将理论塔板数暂定为3000。2.2.2、分离度（R）取供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测

2、定，结果大黄素的分离度R=5.0，符合《中国药典》2005年版一部规定。2.2.3、拖尾因子（T）利用分离度测定的图谱，大黄素T=1.03（0.95<T<1.05）。符合《中国药典》2005年版一部规定。2.3、线性范围的考察分别精密吸取大黄素对照品溶液（11.3μg/ml）5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μl，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件，分别进行分析，测定其峰面积值，并以对照品量（X）为横坐标，峰面积值（Y）为纵坐标，得大黄素回归方程：Y=2509642X-4639（r=0.9999，n=5）。结果表明：大黄素对照品在0.0565～

3、0.1695μg范围内成良好的线性关系，结果见表1。表1大黄素的线性范围　　2.4、精密度试验精密吸取大黄素对照品溶液20μl，连续进样5次测定峰面积值，计算RSD=0.56%，结果见表2。表2大黄素的精密度试验结果（n=5）试验证明，本法精密度良好。　　2.5、稳定性试验取供试品溶液，每隔2小时进样，测定峰面积，结果表明：供试品溶液在所测定的10小时内测得结果基本一致，大黄素的RSD=0.60%，见表3。表3稳定性试验表5表4重复性试验实验表明：本法重现性良好。2.7、回收率试验取已知大黄素含量（0.24mg/粒）的样品（批号：050812）6份，每份约0.25g

4、，分别精密加入大黄素对照品溶液（0.1445mg/ml）1ml，按上述供试品溶液的制备方法进行制备，测定，结果见表5。2.8、试液的制备对照品溶液的制备精密称取在105℃干燥至恒重的大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含大黄素5μg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取约0.45g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置具塞烧瓶中，蒸干，加2.5mol/L硫酸溶液10ml和三氯甲烷20ml，加热回流2小时，分别取三氯甲烷液，水

5、层用三氯甲烷振摇提取，合并三氯甲烷液，用水10ml洗涤取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取续液，作为供试品溶液。阴性对照品溶液的制备按处方组成，提取制何首乌、决明子外的其余药材，按制备工艺要求，制成不含制何首乌、决明子的颗粒，按供试品溶液制备项下的方法，制成阴性对照品溶液。3、讨论血脂灵胶囊，为血脂灵片改变剂型而成，其处方与血脂灵片相同，生产工艺为质的改变，一粒胶囊相当于一片片剂（所含生物量为2g）其[用法用量]与血脂灵片相同，参照2005年版中国药典一部，血脂灵片[含量测定]项的含量限度的规定及本品的十批样品的

6、含量测定结果。考虑到药材的不同及工业化大生产的特点等因素，将本品的含量限度订为本品每粒含制何首乌、决明子以及大黄素（C15H10O5）计不得少于0.15mg。经十批样品检查，含量均符合规定。