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1、HPLC法测定红穿破石中大黄素的含量【摘要】目的建立红穿破石中大黄素含量的高效液相色谱测定方法。方法选用EclipseXDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液(75∶25)为流动相,检测波长为285nm。结果大黄素在0.0063～0.063μg范围内呈良好的线性关系(r＝0.9999),平均回收率为102.0%,RSD＝1.58%(n＝6)。结论本法简便,准确,可用于红穿破石中大黄素的含量测定。【关键词】红穿破石；大黄素；高效液相色谱法Abstract：ObjectiveToestablishaHPLCmethodfordetermini
2、ngemodininRadixetCaulisVentilaginisleiocarpae.MethodsStationaryphasem×150mm,5μm),mobilephaseethanol-0.1%phosphoric(75∶25),detection,floL/minandcolumntemperatureodin(r＝0.9999).Theaveragerecoveryofemodinethodisrapidandaccurate.ItcanbeappliedtocontrolthequalityofRadixetCaulisVentilaginisleiocar
3、pae. Keyodin；HPLC红穿破石为鼠李科植物翼核果VentilagoleiocarpaBenth.的干燥根和老茎,主产于广西等地[1],具有清热利湿、利尿通淋的作用,特别是对消石具有特殊功效,民间常用于尿路感染、急慢性肾炎、肾结石的治疗,现已有多个制药厂家把它作为治疗结石症的重要组方。王氏等[2]报道,从广西产红穿破石根和茎中分离到大黄素、大黄素甲醚、1,2,4,8-四羟基-3-甲基蒽醌、翼核果醌-Ⅰ、翼核果素,其中大黄素为该植物的主要化学成分。有关红穿破石的主成分含量测定尚未见报道。本试验采用HPLC法对红穿破石中大黄素进行含量测定,为药材生产和质量标准提供科学依
4、据。 1仪器与试药 美国Agilent1100系列高效液相色谱仪(包括四元泵,自动进样器,脱气机,紫外可见检测器,柱温箱和Agilent1100化学工作站),BUG40型超声波清洗器(上海必能信有限公司)。 大黄素对照品(批号110756-200110,含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供,纯度在98%以上；红穿破石由广西玉林制药有限责任公司提供,于广西各地,经广西玉林制药有限责任公司中药鉴定室专家鉴定。水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件 AgilentEclipseXDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm
5、)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(75∶25)；流速：1.0mL/min；检测波长：285nm；柱温：30℃；进样量：10μL。理论板数按大黄素计算应不低于3000。在此色谱条件下,红穿破石样品能够达到基线分离(见图1)。 2.2对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品适量,加甲醇制成每1mL含大黄素6.3μg的溶液,作为对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备取红穿破石粉末适量,取0.4g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,称定重量,超声30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
6、 2.4线性关系的考察分别精密吸取大黄素对照品溶液(6.3μg/mL)1、2、4、6、8、10mL,置于10mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10μL,连续进样2次,测定峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝4172.28A＋0.46,r＝0.9999,结果表明,大黄素在0.0063～0.063μg范围内呈良好的线性关系。 2.5精密度试验取大黄素对照品溶液,各重复进样6次,测定峰面积,结果大黄素峰面积值为265.8、268.5、265.8、268.3、267.9、267.7,RSD＝0.4%。表明具有较好的精密度。
7、 2.6重现性试验取同一批的样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定大黄素峰面积,结果为222.2、223.9、222.0、225.2、223.7、222.6,RSD＝0.5%。表明该法重现性良好。 2.7稳定性试验取同一供试品溶液,分别于配制后0、4、8、12h,依法测定峰面积,结果RSD＝0.25%,表明样品溶液在12h内基本稳定。 2.8加样回收率试验 取已知大黄素含量的红穿破石粉末约0.2g,平行称取6份,分别精密称定,各加入一定量的大黄素对照品,按“2.3”项下方法
