hplc法测定生首乌和制首乌中大黄素的含量

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1、HPLC法测定生首乌和制首乌中大黄素的含量【关键词】何首乌大黄素HPLC　　HPLCMeasuretheContentofEmodininRaeasurementofemodincontentinracolumnSPHERISORBODS2（150×4.6mm，5μm），theflobeingmethanol–0.1%phosphate（85：15），themeasurement，columntemperature：28℃，flol·in-1.［Result］TheregressionequationY=3352.3X

2、+37.297，thelinearrange：0.03～0.20μg，theaveragereceptionrateoftheraethodiscorrectandquick，odin；HPLC　　何首乌（PolygonummultiflorumThunb.）为蓼科植物何首乌的块根，中药理论认为，其生用具有解毒、消痈、润肠通便的功效，多用于瘰疬、疮痈、风疹瘙痒、肠燥便秘、高血脂等症；制首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨等功效，多用于血虚萎黄、眩晕耳鸣、须发早白、腰膝酸软、肢体麻木、崩漏带下、高血脂等症［1］。生、制

3、何首乌的临床功效之所以不同，是由于药材经过炮制后所含成分发生变化而造成的。据报道，何首乌药材在炮制的过程中以大黄素为代表的蒽醌类含量会随着炮制时间的延长而减少［2］。本文采用HPLC法测定生首乌和制首乌药材中大黄素的含量，为其生制两用的原因及药材的质量控制提供一定的科学依据。　　1仪器与试药　　1.1仪器ETTERTOLEDOAG135电子天平；BS110S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。　　　　1.2试剂与药材甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。大黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：1107

4、56-200110），生首乌和制首乌均购自亳州市永刚饮片厂并经鉴定为(PolygonummultiflorumThunb.)。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：SPHERISORBODS2（150×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-0.1%磷酸（85∶15），检测波长为254nm，柱温28℃，流速1.0ml·min-1。在此色谱条件下，供试品色谱与对照品色谱在相同的保留时间处有相应色谱峰，与其它组分能基本达到基线分离，理论塔板数以大黄素峰计不小于3000。　　2.2溶液的制备(1)对照品溶液的制备精密称量大黄

5、素对照品3.0mg，置25ml量瓶中，加甲醇定容后，摇匀，即得浓度为0.12mg·ml-1的对照品溶液。(2)供试品溶液的制备［3］1)生首乌，药材经粉碎后过60目筛并干燥至恒重。精密称取药材粉末0.2g，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，挥去甲醇，加8%盐酸溶液10ml，超声处理2min，再加氯仿10ml，加热回流60min，冷却，置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合

6、并氯仿液，减压回收至干，用甲醇定容于10ml量瓶，微孔滤膜滤过，即得。2)制首乌，药材经粉碎后过60目筛并干燥至恒重。精密称定药材粉末0.5g，精密加甲醇30ml，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤10ml，其他操作同上，最后残渣加甲醇溶解，并定容于2ml量瓶，微孔滤膜滤过，即得。　　2.3标准曲线的制备用微量移液器精密吸取对照品溶液适量，用甲醇稀释制备若干份，注入液相色谱仪10μl，以浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，进行线性回归，求得回归方程：Y=3352.

7、3X+37.297，r=0.9995。结果表明大黄素在0.03～0.20μg范围内，呈良好的线性关系。　　2.4精密度试验精密吸取对照品溶液，重复进样6次，每次10μl，结果RSD为0.84%（n=6）。　　2.5稳定性试验取生首乌和制首乌供试品溶液10μl，分别于配制后0、2、6、12、24h后进样，按上述色谱条件测定，RSD分别为2.3%和2.7%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。　　2.6重复性试验取同一批号生首乌和制首乌药材各6份，按“2.2.2.1”项制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件，注入10μl，测定

8、峰面积，并由回归方程计算生首乌和制首乌样品的含量，结果其RSD分别为0.89%和1.1%，表明此方法重复性良好。　　表2大黄素含量测定结果(n＝6)（略）　　图1高效液相色谱图（略）　　A.制首乌B.生首乌C.对照品；1峰为大黄素峰　　3讨论　　3.1本文建立了HPLC法测定生首乌和制首乌中大黄素的含量，样品中大黄素峰与其他峰能达