hplc测定核黄素磷酸钠中核黄素的含量论文

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1、HPLC测定核黄素磷酸钠中核黄素的含量论文【关键词】核黄素磷酸钠摘要:目的建立核黄素磷酸钠中核黄素的含量测定方法。方法高效液相色谱法，采用NH2色谱柱，以乙腈0.02mol/L磷酸二氢钾（体积比67∶33）用稀盐酸调pH5.3为流动相，荧光检测，激发波长：445nm，发射波长：520nm。结果核黄素在0.1092～2.184μg/mL范围与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为99.1%，RSD为1.5%。结论本方法准确.freelethodsofriboflavininriboflavinsodiumphosphate.M

2、ethodsHPLCmethodineriboflavininriboflavinsodiumphosphaten.Themobilephaseconsistedofacetonitrile-0.02mol/Lpotassiumdihydrogenphosphate(67∶33)(adjustedthesolutionetricdetector,excitation,emission.ResultsRiboflavinhadagoodlinearity(r=0.9999)L.Theaveragerecoveryethodisaccurate,

3、sensitiveandrapid.Keyphosphate；HPLC核黄素磷酸钠中国药典［1］、美国药典［2］、英国药典［3］均有收载。中国药典没有对有关杂质进行测定，美国药典和英国药典均采用非极性的C18柱进行分离测定。但由于核黄素的极性小，保留时间较长，整个分离分析约需45min，另外峰较宽，检测灵敏度较低。本文采用高效液相色谱法对核黄素磷酸钠的有关杂质核黄素进行含量测定，采用极性的NH2柱，用荧光检测，核黄素的保留时间约2.9min，峰锐，大大缩短了分离分析的时间，方法灵敏，结果准确。1仪器与试药岛津LC―10AT液相色谱仪，带SIL

4、―10AT自动进样器，RF―10AXL荧光检测器，Classvp5.0色谱工作站。核黄素对照品为美国药典参考标准(USPR.S.)由广州药物研究中心提供。核黄素磷酸钠，批号：03704(由顺德南方生物制药有限公司提供)；批号：040118―1、040118―2(由珠海生物化学制药厂提供)。乙腈为色谱用试剂，磷酸二氢钾为分析纯试剂，稀盐酸按中国药2005年版二部配制，水用纯水器制备的高纯水。2方法与实验2.1溶液配制2.1.1核黄素对照贮备液的制备取核黄素对照品约10mg，精密称定，置100mL棕色量瓶中，加36%盐酸0.2mL使溶解后，加水稀

5、释至刻度，摇匀，备用。2.1.2对照品溶液的制备精密量取核黄素对照贮备液3mL，置25mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置20mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。2.1.3供试品溶液制备取本品约10mg，精密称定，置50mL棕色量瓶中，加水6mL使溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置20mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇篮匀。2.2测定方法2.2.1色谱条件色谱柱：NucleosilNH25μm(150mm×4.6mm)；流动相：乙腈0.02mol/L磷酸二氢钾(67∶33)用稀盐酸调pH5.

6、3；流速：1.0mL/min；荧光检测，激发波长：445nm；发射波长：520nm。在上述色谱条件下，分离核黄素和核黄素磷酸钠的色谱图见图1。2.2.2测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各50μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算核黄素的含量。2.3方法验证2.3.1专属性试验取本品，照“2.1.3”项下方法操作，测定。供试品溶液呈现与对照品溶液主峰保留时间、峰形一致的色谱峰。经供试品溶液与对照品溶液混合分离，以及调整流动相再分离，核黄素对照品主峰与供试品呈现相应的色谱峰始终重叠，峰形也没广东药学院学报，2006，22(

7、1)第1期邓洁雄.HPLC测定核黄素磷酸钠中核黄素的含量有改变，证实供试品呈现与对照品主峰保留时间一致的色谱峰为核黄素的色谱峰。2.3.2标准曲线绘制精密量取核黄素对照品贮备液3mL，置100mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、20.0mL，各置25mL棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，测定。以峰面积（A）为横座标，相应的质量浓度(ρ)为纵座标作图，求得一元线性回归方程：ρ=2.5664×10-7A-00042257，r=0.9999(n=6)。可见核黄素在0.1092～2.1

8、84μg/mL浓度范围与峰面积呈良好的线性关系。2.3.3重复性试验制备两份对照品溶液，每份进样3次，结果核黄素的平均响应值为2.5609×10-7，RSD=0.7