《核黄素的测定》PPT课件.ppt

《《核黄素的测定》PPT课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验四核黄素（VB2）荧光光度定量测定法1一、实验目的了解荧光法测定核黄素的原理和方法学习荧光光度计的操作和使用掌握荧光定量分析工作曲线法2二、实验原理核黄素在pH4~9的条件下，用440～500nm波长的光激发，核黄素可发出波长为525nm的荧光在稀溶液中，荧光强度与核黄素浓度成正比测定B2标准系列溶液的荧光强度和浓度,做标准曲线测定样品中B2的荧光强度，查标准曲线得出含量3三、实验物品仪器：930型荧光光度计、分析天平样品：核黄素片试剂：核黄素标准溶液6mol/L醋酸器皿：大试管：8个吸管：1ml、2ml、10ml各一支容量瓶1000ml1个4四、操作步骤1、标准曲线绘制将配

2、好的10μg/ml标准核黄素溶液，按下表所示比例稀释成6个标准溶液123456标准0.00.20.51.01.52.0水10.09.89.59.08.58.0F管号项目单位：ml5四、操作步骤2、样品溶液的配置准确称取核黄素药片4片，溶于2000ml蒸馏水中按下表所示加入试剂单位：ml12样品2.02.0水8.08.0F管号项目6四、操作步骤3、上机测定选用滤光片激发光波长：用带通型400nm滤光片发射光波长：用截止型510nm滤光片选择灵敏度标准曲线的测定样品的测定7五、记录结果与计算1、记录荧光强度F2、计算核黄素mg/100g=F×V总×100m×V用×10008六、注意事

3、项VB2怕光，实验时应尽量避光选择合适的灵敏度值样品液测定条件与标准曲线测定条件一致比色皿是石英材质，注意不要损坏实验报告不能照抄实验指导四人作一组实验每组比色时间10min9七、思考题1、荧光测定的方法有哪几种？2、荧光法测定VB2时应注意哪些问题10930A型荧光光度计仪器讲解波长：330nm～700nm滤光片的种类激发滤片：范围：330nm~530nm330、360、400、500、530nm荧光滤片：420nm~650nm420、450、470、510、550、600、650滤光片的选择根据被测溶液的激发光谱和荧光光谱选择11930A型荧光光度计仪器讲解使用步骤安装滤光片

4、开机→101010参数的设置1）光闸的设置：参数1输入（关OFF）2）输入日期：参数2输入090927输入3）输入激发波长：参数3输入400输入4）输入发射波长：参数4输入510输入5）输入打印状态：参数5输入1输入ON12930A型荧光光度计仪器讲解使用步骤参数的设置6）选择拟合标准曲线：参数6输入1输入1是一次2是二次3是点到点7）起始号输入：参数8输入001输入1号起8）灵敏度设置：灵敏度数值输入1—999注：最大荧光强度为999，因此最大浓度不要超过99913930A型荧光光度计仪器讲解使用步骤标准曲线的测量1）按标准键放入空白0输入读取荧光光度值放入第一管02→输入显示

5、0.2读取荧光光度值放入第二管05→输入显示0.5读取荧光光度值放入第三管10→输入显示1.0读取荧光光度值放入第四管15→输入显示1.5读取荧光光度值放入第五管20→输入显示2.0读取荧光光度值2）输入结束，再按标准键：打出拟合一次曲线14930A型荧光光度计仪器讲解使用步骤样品的测量：放入被测样品测量仪器会显示出被测样品的浓度值，并打印出荧光值和浓度值记录：相应标准的荧光强度，做标准曲线图根据测量的浓度值，计算出结果151617181920液槽记录仪单色器检测器I0IIf单色器光源212223概念维生素是一类维持动物机体生命活动必不可少的一类低分子有机化合物维生素的种类脂溶性

6、维生素：VitA、VitD、VitE等水溶性维生素：B族、VitC等24概念核黄素的特点在水溶液中具有较强的荧光强度干燥或酸性溶液中稳定碱性溶液中较易破坏遇光易氧化对热稳定耐氧25概念含核黄素的食物以肝、肾、心、蛋、奶含量最多其次是豆类和新鲜绿叶蔬菜B2缺乏口角炎、舌炎、皮肤炎、唇干裂等26概念什么是荧光当紫外光照射某一物质时，该物质会在极短的时间内，发射出较照射光波长更长的光荧光光谱激发光：被荧光物质所吸收的照射波长的光发射光：把产生的荧光称发射光仪器部件激发光源、液槽、单色器、检测器、记录器27概念定量的依据在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下的关系：F=kI0εlCF

7、：荧光强度k:常数；I0:激发光强度；ε：摩尔消光系数l：溶液厚度C：溶液浓度当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系F=kC28概念定量的依据对于同一物质，当激发光强度I0和溶液厚度l一定时，荧光强度和物质的浓度成正比荧光分析法的特点灵敏度高选择性好、线性范围宽所用的样量少,操作方法简便29概念影响荧光的因素溶剂的影响pH温度光分解样品的浓度30概念影响荧光的因素溶剂的影响pH温度光分解样品的浓度31概念荧光计的种类荧光计荧光分光光度计荧光检测的方法直接荧光测定法间