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1、血小板单核细胞聚集体对全麻手术患者血小板活化状态观察重要性【摘要】目的：观察血小板单核细胞聚集体(PMA)在全麻手术前后及术后3d的变化，了解检测PMA对全麻手术前后血栓形成预测的意义。方法：流式细胞术检测112例全麻手术患者手术前、手术后及手术后3dCD62p、CD63、PMA的表达，比较其在3个不同时间的差异。结果：112例患者麻醉诱导前、手术后、术后3dCD62p的表达分别为(16.74±9・67)%、(22・76±13・89)%、(20.12±9.83)%；CD63的表达分别为(1.35土0.94)%、(2.26±1.75)
2、%、(1.54±0.81)%；PMA的表达分别为(26.86±5.05)%、(31・86±5・31)%、(77.69±5.72)%；手术后CD62p、CD63、PMA,术后3dCD62p、PMA与麻醉诱导前比较差异均有统计学意义(P1.2主要试剂与仪器鼠抗人CD62p-PE,鼠抗人CD63-FITC,同型对照(鼠IgG-FITC和鼠IgG-PE),由BD公司提供；鼠抗人CD41-FITC,鼠抗人CD61-PE,鼠抗人CD45-pc5,由美国beckmancoulter公司提供，溶血素为自配甲酸溶血素，流式细胞仪为CoulterEPI
3、CSXL(Beckmancoulter公司)。1.3标本采集分别于患者手术麻醉诱导前，手术结束及手术后3d采集标本进行CD62p、CD63和PMA检测。1.4实验方法1.4.1CD62p检测取抗凝全血500r/min,离心5min,取上层富血小板血浆，用PBS调整血小板数为100X109〜200X109/L,备用。在两支流式试管中均加入10uL鼠抗人CD41-FITC后，其中1支试管加入10UL鼠IgGPE作为同型对照管，另1支试管加入1011L鼠抗人CD62P-PE作为测试管，分别加入50uL富血小板血浆，混匀。室温避光孵育20m
4、in后，用1mLPBS缓冲液洗涤1次，离心,弃去上清。然后，加入500uLPBS缓冲液混匀后置流式细胞仪上进行检测。1.4.2CD63检测取抗凝全血500转/min,离心5min,取上层富血小板血浆，用PBS调整血小板数为100X109〜200X109/L,备用。在两支流式试管中均加入10UL鼠抗人CD61PE后，其中1支试管加入10订鼠IgGFITC作为同型对照管，另1支试管加入1011L鼠抗人CD63FITC作为测试管，分别加入50uL富血小板血浆，混匀。室温避光孵育20min后，用1mLPBS缓冲液洗涤1次，离心，弃去上清。然
5、后，加入500uLPBS缓冲液混匀后置流式细胞仪上进行检测。1.4.3PMA检测在两支流式试管中均加入5UL鼠抗人CD45pc5后，其中1支试管加入10uL鼠IgGlFITC作为同型对照管，另1支试管加入10uL鼠抗人CD41FITC作为测试管，分别加入50ULEDTA抗凝全血，混匀。室温避光孵育20min后，用甲酸溶血素溶血，PBS缓冲液洗涤1次。然后，加入500〜1000uLPBS缓冲液混匀后置流式细胞仪上进行检测。1.5流式分析（1）分别以CD41和CD61设门，圈定血小板（图1和图3）,以同型对照分别设定CD62p和CD63
6、阴性界限，观察血小板上CD62p和CD63的表达百分率（图2和图4）。（2）利用CD45和SS散射光参数，可以将外周血细胞分为中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞3群（图5）。CD41抗原也称为血小板gpllb,是一种血小板上的特异性膜糖蛋白标记，如果单核细胞上显示有CD41,说明单核细胞上黏附有血小板，称为PMA,以百分比表示，以同型对照管设定PMA阴性细胞界限，可以用单参数图或散点图显示PMA的表达（图6和图7）o1.6统计学处理采用SPSS19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，以P参考文献[1
7、]王振义，李家增，阮长庚•血栓与止血基础理论与临床[M].第2版.上海：上海科学技术出版社,1996:378-379.[2]MichesonAD,BarnardMR,KruegerLA,etal.Circulatingmonocyte-plateletaggregatesareamoresensitivemarkerofinvivoplateletactiviationthanplateletsurfaceP-selectin[J].Circulation,2001,104(14)：1533.[1]RitterLS,StempelK
8、M,CoullBM,etal.Leukocyte-plateletaggregatesinratperipheralbloodafterischemicstrokeandreperfusion[J]・BiolRes,2005,6(2)
