11微生物的培养和应用

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1、课题微生物的培养和应用【教学要求】1、知识与技能：了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术2、过程与方法：分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前而的实验设计,归纳共性，分析差异，增加印象3、情感、态度与价值观：形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神【教材分析】1、课题重点：无菌技术的操作2、课题难点：无菌技术的操作3、教材地位：本课题介绍了最基本的微生物技术，专题中所强调的无菌操作技术，将有助于“植物组织培养技术”的顺利完成。【学习导航】学生通过本专题的学习，应

2、当掌握培养基、消毒灭菌等有关微生物培养的基础知识，应当掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基木操作技术，并可以运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物分离与培养等实际问题。【导学过程】1.基础知识1.1培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。K思考Q琼脂是从红藻屮提取的多糖，在配制培养基屮用作为凝固剂。【补充】培养基的类型及其应用：标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离，鉴定，计数半固体培养基加入琼脂佼少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知

3、成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离1.2培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。K思考2』从细胞的化学元素组成来看，培养基屮为什么都含有这些营养成分？C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97%以上。【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸

4、盐、牛肉膏、蛋白腺等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、0、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。1.3培养基除满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求。【补充】生长因子:某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子,如某些氨基酸、碱基、维生素等。K思考31牛肉膏和蛋白腺主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。K思考4》培养乳酸杆菌时需要添加维生素,培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。活动2：阅读“无菌技术”，讨论冋

5、答下列问题：1.4获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。1.5无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒:（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行;（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。1.6比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽泡和泡子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能K思考5》无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者。1.7消毒方

6、法：生活经常用到的是煮沸消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。1.8灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热火菌法，所用器械是干热灭菌箱；（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。K

7、思考6》对接种环灭菌时要用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。K思考7』利用干热火菌箱对玻璃器皿火菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。K思考8』物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热，气压升至100kPa,温度为121°C,并维持15〜30min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器屮的液体暴沸。【补充】培养基的配制原则：①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培

8、养基的类型和配制量。②营养要协调：培养基屮各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4：1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3：1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。2.实验操作2.1计算：根据配方比例，计算WOrnL培养基各成分用量。2