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1、一、微生物的实验室培养1.培养基(1)种类:按培养基的物理性质分为:①液体培养基:配制成的液体状态的基质,一般用于生产。②固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂(如琼脂),配制成的固体状态的基质,琼脂固体培养基是实验室中最常用的培养基之一。(2)培养基配方及营养要素基本营养要素:各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。固体培养基适合于分离、鉴定微生物,并且对微生物的计数也适合用固体培养基。但液体培养基适合利用微生物进行发酵,因为液体状态下微生物与营养物质的接触面积大,微生物代谢活动较强。2.无菌技术(1)消毒和灭菌的区别条
2、件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌酒精消毒时,70%的酒精杀菌效果最好,原因是:浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。(2)无菌技术具体操作①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经
3、灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触.3.纯化大肠杆菌以及菌种的保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:计算、称量、熔化、灭菌、倒平板。(2)纯化大肠杆菌①原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。②方法:平板划线法、稀释涂布平板法。(3)菌种的保藏①短期保存:固体斜面培养基上4℃保存,菌种易被污染或产生变异。②长期保存:-20℃甘油管在冷冻箱中保藏。平板划线法和稀释涂布平板法对大肠杆菌的纯化的比较(1)平板划线法中由于划线时,每次从上一次划线的末端开始,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,
4、最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(2)稀释涂布平板法中,由于将菌液进行了一系列的梯度稀释和涂布培养,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,形成单个菌落。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验,请回答有关问题。(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果,选用适宜的方法接种样品:下图是利用法进行微生物接种,把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面,为达到这一目的,操作上应注意。(3)适宜温度下培养。结果分析:①一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为32.4个,那么每毫升样品中的细菌数是(接种时所用稀释液的体积为0
5、.1mL)个。②用这种方法所得的数量比实际活菌数量要,因为。(4)在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,操作者的双手需要进行清洗和;已灭菌的材料用具应避免。(5)培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是。解析:(2)题图为平板划线法分散培养基表面的菌种,操作时应注意保持无菌,第二次及以后每次划线前接种环要灼烧,冷却后从上一区划线末端开始划,首尾区不重叠以便于分散菌种。(3)①根据公式菌株数=×M=×105=324×105=3.24×107个。②由于每个菌落可能是由两个或多个细胞一起形成的,所以此法所得的活菌数比实际活菌数要少。(4)操作者双手
6、用酒精消毒;已灭菌的材料应避免与周围物品接触,防止再次被污染。(5)接种前检测培养基是否被污染可将未接种的培养基倒置在适宜温度下培养,观察培养基是否有菌落出现,若无则未被污染,若有则已被污染。答案:(2)平板划线 第二次及以后每次划线前接种环要灼烧,冷却后从上一区划线末端开始划,首尾区不重叠(3)①3.24×107②少 当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的是一个菌落(4)消毒 与周围的物品接触(5)将未接种的培养基在适宜的温度下倒置培养适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.选择合适的培养基(1)根据培养基的用途可分为选择培养基和鉴别培养基。
7、培养基种类特点用途选择培养基培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌,可在培养基中加入青霉素;以尿素为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌)鉴别培养基根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物(如可用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌,若有,菌落呈深紫色,并带有金属光泽)(2)分离分解尿素的细菌的培养基即为选择培养
