专题2--微生物培养和应用.doc

《专题2--微生物培养和应用.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、选修一专题2微生物的培养与应用【夯实基础】一、必备知识（一）培养基1.根据物理性质划分的培养慕种类、用途°标准培养基类型配制特点主要应用固体培养基加入琼脂较多菌种分离、鉴定、计数物理性质半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产、连续培养2.培养基的慕本成分和主要来源。营养物质含义主要来源碳源能提供碳元素的物质无机物：C02、NaHCOS；有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等氮源能提供氮元素的物质无机物：N2、NH3、氨盐、硝酸盐；有机物：尿索、牛肉膏、蛋白腺等水细胞生命活动必不可少的物质培养基、大气、代谢产物无机盐提供除碳、氮元素以外的各种重耍元素，包

2、括某些大量元素培养基、大气（二）无菌技术1.主要方面（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌:（3）为避免周I韦I微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行;（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。2.消毒与灭菌的比较项目理化因素强度消灭微生物数量是否消灭芽泡和抱子消毒温和部分否灭菌强烈全部是3.常用的消毒与灭菌的方法（1）消毒方法：①口常牛活经常用到的是煮沸消毒法;%1对一些不咐高温的液体，则使用巴氏消毒法;%1对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物

3、理消毒°%1实验操作者的双手使用酒精进行消毒：%1饮水水源用氯气进行消毒。（2）灭菌方法：%1接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；%1玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱;%1培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。%1表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。实验操作（1）制备牛肉膏蛋白腺固体培养基%1操作步骤计算-称量->溶化-灭菌一倒平板%1倒平板的方法及注意事项a.请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙一乙一甲一丁。b・甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。c.丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。(2)

4、纯化大肠杆菌的方法%1纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。%1纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。%1常用的微生物接种方法有两种乩平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。b.稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表而，进行培养。(3)菌种的保存方法%1对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。%1对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。(三)微生物的分离与计数1.筛选菌株(1)自然界中日的菌株筛选的依

5、据是根据它对牛存环境的要求,到相应的环境中去寻找。(2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。(3)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或_阻止—其他微生物生长的培养基，称作选择培养基。2.统计菌落数日(1)常用方法：稀释涂布平板法。(2)统计依据：当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落，來源于样品稀释液中的一个活菌°通过统计平板上的菌落数，就能推测出样吊大约含有多少活菌。(3)平板选择菌落计数时一般选菌落数在30・300的平板,计数公式为每克样品小的菌落数=(

6、CmV)xM。3.统计菌落数冃的方法(1)显微镜有接计数法%1原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。%1缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，來源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。二、概念辨析1.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、包括芽胞和砲子()2.微生物接种过程都耍在酒精灯的附近进行()3.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在1111盖上()1.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

7、()2.稀释涂布平板法用于微生物的分离计数，统计结果比实际值可能偏大()3.分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源（）4.—个菌落往往是一个细胞在固体培养基上克隆的结果（）5.固体斜面培养基可用于菌种的临时保藏（）6.每次划线结朿，灼烧接种环是为了杀死上次划线结朿后接种环上残留的菌种（）10•噬菌体和大肠杆菌都可直接在蛋白豚培养棊中增殖（）【典型例题】1.下列关于制备牛肉膏蛋白腺固体培养基的叙述，错误的是（）A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C.待培养