专题2__微生物的培养与应用(用).ppt

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1、专题2微生物的培养与应用微生物的概念与分类概念：个体多数十分微小，结构都相当简单，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到的低等生物。特点小（个体微小）简（结构简单）低（进化地位低）微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌、霉菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻等原核细胞课题1微生物的实验室培养防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保其他微生物无法混入。一、基础知识：（一）培养基（二）无菌技术（一）培养基人们按照微生物对

2、营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。按物理状态分2.类型1.概念：液体培养基固体培养基（加入凝固剂琼脂）固体培养基液体培养基一般用于增菌（扩大培养）、工业生产一般用于分离纯化、鉴定、计数菌落由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体按功能状态分选择培养基鉴别培养基基础培养基种类用途例选择培养基鉴别培养基从众多微生物中分离所需的微生物鉴别不同种类的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌伊红—美篮培养基使大肠杆菌的菌落呈深紫色，可以鉴别大肠杆菌几种选择培养基：加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加

3、含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物3.营养成分：不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质。讨论：为什么大多数培养基都含有这四类物质？（1）基本成分：碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方培养基组分提供的主要营养牛肉膏5.0g碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨10.0g氮源和维生素NaCl5.0g无机盐H2O定容至1000ml氢元素、氧元素（2）特殊营养：细菌生长必需，而往往自身不能合成的化合物，如维生

4、素、某些氨基酸、碱基等（3）pH、氧气等要求1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。定义方法2.消毒与灭菌较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线消毒灭菌灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌芽孢有些细菌在一定的条件下，

5、细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。放线菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休眠作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。孢子煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源紫外线消毒消毒的方法：干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持

6、15-30min.灼烧灭菌灭菌的方法：1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。旁栏思考2、请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手灭菌高压蒸气灭菌灭菌高压蒸气灭菌/干热灭菌消毒旁栏思考微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存二、实验操作准备工作（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1．计算2．称量3．

7、溶化4．调pH5．灭菌6．倒平板配制步骤：倒平板技术倒平板技术1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。1234倒平板技术2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。1234倒平板技术12343.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。倒平板技术12344.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，