专题2 微生物的培养与应用

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1、专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养1.何为培养基？不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养成分？有何作用？请举例说明。2.无菌技术包括哪些方面？消毒和灭菌的区别？常用的消毒方法有哪些？常用的灭菌方法有哪些？自主学习:P14-16培养基和无菌技术一、基础知识：（一）培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种的分离、计数、鉴定,液体培养基常用于工业生产。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴

2、别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型和用途液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方。3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物，如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。1.消毒：利用较为温和的化学或物理方法，杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）的过程。（二）无菌技术2.灭菌

3、：用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物（包括芽孢和孢子），而达到完全无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落：菌

4、落细菌的菌落特征因种而异(1)消毒的方法：常用的消毒与灭菌的方法1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min；2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min；3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源；4、紫外线消毒；……1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(2)灭菌的方法：1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适

5、的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考微生物实验室培养的基本操作程序1.器具的灭菌2.培养基的配制3.培养基的灭菌4.倒平板5.微生物接种6.恒温箱中培养7.菌种的保存（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）二、实验操作：1．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7．64．过滤：这一步可以省去。5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不

6、超过三角烧瓶容积的一半为宜。6．加塞7．包扎操作步骤8．灭菌:将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。9．倒平板:待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。10．无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。倒平板技术1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来

7、倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。二、纯化大

8、肠杆菌微生物接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次画线后，可以分离到由一个细