专题2微生物培养与应用

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1、专题2微生物的培养与应用一、微生物在现代生物技术中有哪些应用？提取工具酶：提供运载体：作为受体细胞：提供目的基因：构建基因文库：发酵工程的工程菌：限制性核酸内切酶、DNA连接酶等细菌质粒、λ噬菌体、动植物病毒等培养转基因微生物抗虫基因、抗病基因等直接分离目的基因构建基因组文库、逆转录构建cDNA文库生产味精的谷氨酸棒状杆菌、生产酸奶的乳酸杆菌等㈠培养基P2841.五大基本成分：各种培养基一般都含有碳源、氮源、生长因子、水和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。1、提供

2、微生物生长繁殖所需营养和环境条件2、确保其它微生物无法混入二、实验室培养微生物条件——培养基——无菌技术氧元素、氢元素H2O无机盐NaCl碳源、氮源、维生素蛋白胨碳源、氮源、磷酸盐、维生素牛肉膏提供的主要营养培养基组分培养细菌常用的培养基——牛肉膏蛋白胨培养基②按物理状态不同划分固体培养基液体培养基半固体培养基①按化学组成不同划分：合成培养基/天然培养基2.培养基的种类扩大培养、工业生产含琼脂，用于菌落鉴定、分离和计数观察微生物运动、保存菌种固体培养基：观察菌落、鉴定、分离和计数划线法、稀释涂布

3、分离法半固体培养基：无动力有动力(弥散)观察微生物运动、保存菌种液体培养基表面生长均匀混浊生长沉淀生长③按用途不同划分鉴别培养基选择培养基可在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同种类的微生物。鉴别培养基鉴别培养基是根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同种类的微生物。在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是

4、否存在大肠杆菌等细菌：如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。大肠杆菌在伊红美兰培养基上生长利用拓印法选择出缺少抗氨苄青霉素能力的工程菌。培养基中加氨苄青霉素具有抗氨苄青霉素能力的菌落选择出没有抗氨苄青霉素能力的工程菌没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰选择培养基以下选择培养基可以分离哪些微生物？加入青霉素的培养基杀死细菌、放线菌，分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基杀死多种微生物，分离出金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基分离出自生固氮菌（非固氮菌因缺少

5、氮源被淘汰）不加含碳有机物的无碳培养基分离出自养型微生物（异养微生物因缺少有机物被淘汰）加入抗生素的培养基利用抗生素抗性基因作标记基因，选择分离出导入目的基因的工程菌分解纤维素的微生物的分离（1）实验原理纤维素+染料→红色复合物（纤维素+）+刚果红染料→培养基中出现以纤维素分解菌为中心的刚果红纤维素酶透明圈（2）实验流程土壤取样制备选择培养↓挑选产生透明圈的菌落将样品涂布到鉴别的培养基上纤维素分解菌梯度稀释不同菌落的透明圈大小不同可以说明什么问题？分解纤维素的微生物的分离透明圈的应用（1）筛选具

6、有某种特定功能（如分泌某种酶）的微生物（目的菌）（2）基因工程中表达载体的构建、目的基因的检测与鉴定（3）细菌抗药性的筛选不同菌落的透明圈大小不同可以说明微生物体分解纤维素酶能力的大小。例：通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出A.大肠杆菌B.霉菌（）C.放线菌D.固氮细菌多选DBC（二）无菌技术1、实验室常

7、用的消毒和灭菌方法：⑴消毒：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。煮沸法：100℃5-6min杀死微生物细胞和部分芽孢巴氏消毒法：70-75℃煮30min，杀死牛奶中微生物化学药剂消毒法：酒精、氯气（2）灼烧灭菌——如接种环等：接种时，用于接种工具或其他金属用具灭菌。直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧可以迅速彻底灭菌（3）干热灭菌：用于耐高温需干燥物品（玻璃器皿、金属用具）（4）高压蒸汽灭菌——培养基：用于培养基等物品的灭菌2、无菌操作：操作空间、操作者、

8、培养器皿、接种用具、培养基讨论：1.为什么在实验过程要使用无菌技术？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手⑴防止实验室的培养物被其他外来微生物污染；⑵避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。三、纯化实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1、计算2、称量3、溶化4、灭菌5、倒平板倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作在酒精灯火焰周围③冷凝后平板倒置讨