21微生物的培养和应用.doc

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1、专题二微生物的培养和应用课题1微生物的实验室培养一、基础知识：（一）培养基1.培养基是人们按照微生物对营养物质的需求不同而配制出供其生长繁殖的营养基质，培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。2.琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。【开拓视野1】培养基的类型（记忆）及其应用分类标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离、鉴定、计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产的连续培养化学组成合成培养基由已知化学成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培

2、养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确用于工业生产降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离3.各种培养基的用途培养基名称应用培养基名称应用牛肉膏蛋白豚培养基培养细菌杳氏培养基培养霉菌营养琼脂培养基培养细菌MY培养基霉菌和酵母菌传代保藏麦芽汁琼脂培养基培养酵母菌尹红美蓝培养基检测水屮大肠杆菌含量马铃薯琼脂培养基培养真菌MS培养基用于植物组织培养4•培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。此外，培养基还要满足微生物生长的pH、特殊营养物质和

3、氧气等要求。【开拓视野2】有机营养成分及其作用碳源：如CO?、糖类、脂肪酸等含碳有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白腺等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。生长因了：某些微生物正常生长代谢中必须从培养基屮吸收的微量有机小分了，如某些氨基酸、碱基、维生素等。其屮，含有C、H、0、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。【思考1】牛肉膏和蛋白腺的作用是？答：主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。-【思考2】培养乳酸杆菌、霉菌、和细菌时备有什么

4、特殊要求？答：培养乳酸菌时需要添加维生素;培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性；培养细菌时需要将pH调节为屮性或微碱性。（二）无菌技术1•获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。2.无菌技术包括：对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将培养器川L、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。3.比较消毒和灭菌比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽他和抱了能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能

5、【思考3】无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有什么忖的？答：防止感染实验操作者。（三）实验室常用的消毒和灭菌方法1.消毒方法：生活经常用到的是点沸消毒法；对一些不耐高温的液体则用巴氏消毒法；对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液，然后使用紫外线进行物理消毒；实验者的双手使用酒精进行消毒；饮水水源用氯气进行消毒；肌肉注射时所用的皮肤消毒剂有酒精、碘酒;皮肤擦伤后所用的消毒剂有结晶紫、红汞、出。2等。2.灭菌方法：接种环、接种针、试管口等用灼烧灭菌法；接种环的灼烧灭菌（1、2、3液示先后顺字）玻璃器皿、

6、金属用具等用干热火菌法，所用器械是干热火菌箱;干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅培养基、无菌水等用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；3.利用干热灭菌箱对玻璃器川1•灭菌时物品不能太挤，目的是避免妨碍热空气流通。4.高压蒸汽灭菌法：物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌麻，要首先打开排气阀，点沸并扌非除锅内的冷空气目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热，气压升至10OkPa,温度为121°C,并维持15〜30min：切断热源使温度自然降温,气压务必降至零时打开锅盖，其li的是防止容器屮的液体暴沸。二、实验操作（大肠杆菌的纯化

7、培养）（一）制备牛肉膏蛋白豚固体培养基1.计算：根据牛肉膏蛋白豚培养基配方的比例，计算100mL培养基各成分用量。2.称量：牛肉膏较黏稠，可用玻棒挑取，同称量纸一同称量。称取牛肉膏和蛋白豚时动作要迅速,目的是防止牛肉膏吸收空气屮水分。3.溶化：加水加热熔化牛肉膏与称量纸T取出称量纸-加入蛋白月东和氯化钠继续加热一＞加入-＞用蒸馅水定容到100mL（整个过稈不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）。4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎麻用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱火菌。

8、5.倒平板：待培养基冷却至50°C左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：%1在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；%1右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；%1左手将培养1111打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养1111,立刻盖上1111盖。%1待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。【思考4】培养基灭菌后，需要冷却到50°C左