抗ibdv独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及其产物生物学特性测定

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1、!"卷#期生物工程学报()*+!",)+#$%%&年’月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12-.*/$%%&!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!抗!"#$独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及其产物生物学特性测定!，$"$$朱瑞良崔治中赵静（!扬州大学畜牧兽医学院，扬州$$2%%"）（$山东农业大学动物科技学院，泰安$’!%!1）摘要用纯化的抗GHI(GJK免疫H;*LME小鼠，取其脾细胞与NO$M%细胞在聚乙二醇（O=K）作用下融

2、合，=PGNQ法检测筛选，经有限稀释法克隆&次，获得$株（2:#株，$H9株）分泌抗GHI(独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生H;*LME小鼠产生=PGNQ抗体效价分别为!R!$1%%和!R$29%%的含抗GHI(独特型抗体的腹水。用此独特型抗体与福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂乳化制备成抗GHI(独特型抗体疫苗，免疫接种NO:鸡和普通京白公鸡，然后用GHI(强毒株（NI株）$%%%=PI2%攻毒，NO:鸡免疫组2%只，有2只发病、$只死亡；对照组!%只全部发病，1只死亡。普通京白鸡免疫组&%只，有’只发病，!只死亡；对照组!%只全部发病

3、，9只死亡。经3$检验，NO:鸡3$S&#T!2，普通鸡3$$值表得3$$和普通鸡3$均大于3$（4U%T%!），由此表明抗GHI(S!9T91，查3（!）%T%!S9T9&，NO:鸡3（!）%T%!独特型抗体疫苗具有很好的免疫原性，对易感日龄的NO:鸡和普通鸡均具有极其明显的保护作用。从而证实了抗GHI(独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。关键词GHI(，杂交瘤细胞，=PGNQ，抗独特型抗体，生物学特性中图分类号V1!&文献标识码Q文章编号!%%%0&%9（!$%%&）%#0%#9$0%2鸡传染性法氏囊病（GHI）是由鸡传染性法氏

4、囊的免疫防治探索一条新的途径。病病毒（GHI(）引起幼龄鸡的一种急性高度接触性%材料与方法传染病，该病已给养鸡业造成了巨大经济损失。近年来GHI(又呈现新的特点，特别是GHI(超强毒株%&%材料［!］［$］（WWGHI(）和GHI(变异株的出现，使本病的防治%’%’%实验动物及细胞：#$日龄京白NO:鸡，购自又面临新的困境，因此探索新的预防方法和途径是山东家禽研究所NO:鸡场；&2日龄普通京白公鸡当务之急。（GHI(抗体阴性），购自山东农业大学实习畜牧场；［&］自!"’#年-8BF8提出免疫网络学说以来，对H;*LME小鼠，购自解放军

5、军事医学科学院实验动物抗独特型抗体（QFX?0?D?)X/Y?E;FX?L)D/）的研究日益增中心；NO$M%小鼠骨髓瘤细胞，南京农业大学动物传［#，2］多，尤其在感染性疾病方面，如寄生虫、某些病染病实验室提供。［9，’］［1］毒、细菌等。抗独特型抗体不仅可以调节和维%’%’(病毒与血清：GHI(山东株（GHI(0NI株），本持机体免疫系统的稳定性，而且还可以替代抗原作课题组分离，[’%冰箱保存，对&%]#$日龄NO:为疫苗免疫动物，产生免疫应答，抵抗相应病原体的鸡的发病率!%%^，致死率为9%^]12^，对"日龄[&T’9的侵袭。

6、根据这一原理，我们应用纯化的抗GHI(NO:鸡胚卵黄囊接种的=PI2%为!%M%T!>P。抗GJK免疫H;*LME小鼠，通过单克隆抗体（ZEQL）生产鸡新城疫病毒（,I(）、鸡传染性支气管炎病毒技术，建立稳定分泌抗GHI(GJK的ZEQL杂交瘤细（GH(）、鸡传染性喉气管炎病毒（GP7(）、禽脑脊髓炎胞系，以其生产抗GHI(独特型抗体疫苗，为GHI(病毒（Q=(）、禽呼肠孤病毒（Q_(）、鸡马立克氏病收稿日期：$%%&0%!0$1，修回日期：$%%&0%#0!2。基金项目：国家自然基金重大项目基金资助（,)+&"1"&$"%0&）；山

7、东省教育厅科研项目基金资助（,)+-%$3%2）；江苏高校省级重点实验室开放课题基金资助（,)+456%$%&%）。"通讯作者。78*：1902&101$#$&#!；:;<：1902&101$#!#!"；=0>;?*：@A.B*C6D;.+8D.+EF0期朱瑞良等：抗8E"#独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及其产物生物学特性测定0-<病毒（!"#）等血清，本课题组通过免疫$%&鸡制集腹水，所得腹水经.)))IJ@BK离心.)@BK，去沉淀，备，’()*冰箱保存。用间接+?8$C通过酶标仪测定0V)K@的!"值，再!"!"#主要试剂和材料：

8、%+,（-)))、./0)），瑞典加抗生素’()*保存。&1234产品；56%7羊抗鼠89,，军事医学科学院生物:）分泌抗8E"#独特型抗体杂交瘤细胞株染色［.)］制品中心产品；羊抗鼠89,、89,、89,、89,、89