大黄素的制备工作单

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1、大黄素的制备【实训目的】1.能够运用溶剂提取法,pH梯度分离法对大黄中的大黄素进行提取和精制。2.会用显色反应、色谱法进行大黄素的检识。【实训原理】本实验是以乙醇为溶剂，利用大黄素、大黄酚等酸性不同用pH梯度分离法进行提取分离。【实训材料】设备：圆底烧瓶、冷凝管、研钵、索氏提取器、分液漏斗、水浴锅、硅胶CMC-Na薄层板、纤维素粉（柱色谱）、新华色谱滤纸（中速、20cmX7cm）、托盘天平、展开缸（筒）、试管、试管架药品：大黃粗粉、20%硫酸、氯仿、pH8缓冲溶液、pH9.9缓冲溶液、盐酸、冰醋酸、毗噪、5%氢氧化钠溶液、5%碳酸钠溶液、2%氢氧化钠、石油醋（沸程60〜90°C）、苯■乙酸乙

2、酯（8：2）、氨、甲苯、0.5%醋酸镁试液、1%大黄酸标准品氯仿溶液、1%大黄素标准品氯仿溶液、1%芦荟大黄素标准品氯仿溶液【操作步骤】1.游离蔥酿的提取称取大黄粗粉50g,置于200ml圆底烧瓶中，加％20硫酸水溶液100ml,在水浴屮加热回流4〜6小时，稍放冷，过滤，滤渣用水洗至近屮性后，于70°C左右干燥。2.大黄酸的分离向氯仿提取液中一次性地加入pH8的缓冲液70ml,振摇萃取，静置，充分分层后，分取缓冲液于烧杯中，保留氯仿溶液。缓冲液用盐酸调至pH3,析出黄色大黄酸沉淀，静置，过滤，沉淀用蒸憎水洗至近中性，低温干燥，再用冰醋酸重结晶，得大黄酸黄色针晶。3.大黄素的分离分离大黄酸后的

3、氯仿溶液，再一次性地加入pH9.9的缓冲液100ml,振摇萃取，静置，充分分层后，分取缓冲液于烧杯中，保留氯仿溶液。缓冲液用盐酸调至pH3,析出大黃素沉淀，静置，过滤，沉淀用蒸憾水洗至近中性，低温干燥，再用毗噪重结晶，得大黄素橙色结晶。1.芦荟大黄素的分离分离大黄素后的氯仿溶液，再一次性地加入5%碳酸钠溶液-5%M氧化钠溶液（9:1）的碱性溶液200ml,振摇萃取，静置，充分分层后，分取碱性溶液于烧杯中，保留氯仿溶液。碱液用盐酸调至pH3,析岀芦荟大黄素沉淀，静置，过滤,沉淀用蒸憾水洗至近中性，低温干燥，再用乙酸乙酯重结晶，得芦荟大黄素橙色结晶。2.大黄酚和大黄素甲醯的分离分离芦荟大黄素的氯

4、仿液，再以2%氢氧化钠溶液振摇萃取至碱水层近无色为止（3〜4次），合并氢氧化钠萃取液于烧杯中，用盐酸调至pH3,析出沉淀,静置，过滤，沉淀用蒸憾水洗至近中性，低温干燥，取干燥后的沉淀溶于小体积石油醸中，作为柱色谱的样品溶液。装柱：去纤维素粉约8g,加入已装有水饱和石油醍（60〜90°C）的色谱柱屮，待纤维素粉完全沉降后，打开色谱柱下端活塞，将色谱柱内液体放至与柱床面平齐，关闭活塞。样品上柱：将样品溶液用移液管小心加于色谱柱柱床顶端。洗脱：用水饱和石油醸（60〜90°C）洗脱，分段收集，每份10ml,分别浓缩，经纸色谱检查，相同组分合并，分别得到大黄酚和大黄素甲瞇。3.鉴定（1）化学检识取大黄

5、素少许，用乙醴溶解，做如下反应：碱液试验：取试样1ml,加20%氢氧化钠溶液数滴，观察颜色。醋酸镁反应：取试样1ml,加醋酸镁试样数滴，观察现象。（2）薄层检识吸附剂：硅胶CMC-Na薄层板样品：各蔥醍成分的1%氯仿溶液对照品：①1%大黄酸标准品氯仿溶液；②1%大黄素标准品氯仿溶液；③1%芦荟大黄素标准品氯仿溶液展开剂：①苯■已酸乙酯(8：2)；②苯■甲醇(8:1)显色剂：①氨气熏蒸后观察；②5%氢氧化钾喷雾(3)纸色谱检识支持剂：新华色谱滤纸(中速、20cmX7cm)样品：各蔥醍成分的1%氯仿溶液对照品：①1%大黄酸标准品氯仿溶液；②1%大黄素标准品氯仿溶液；③1%芦荟大黄素标准品氯仿溶液

6、展开剂：甲苯显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液【实训说明】1.pH8的缓冲液为磷酸氢二钠■柠檬酸缓冲液。配制方法：取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液194.5ml与0.1mol/L柠檬酸溶液5.5ml混合，即得。PH9.9的缓冲液为碳酸钠■碳酸氢钠缓冲液。配制方法：取0.1mol/L碳酸钠溶液50ml与0」mol/L碳酸氢钠溶液50ml混合，即得。2.各缓冲液进行萃取时，采用一次性加入的方法，实验证明，如将缓冲液分次苹取，分离效果不理想。【实训思考】根据结构分析，说明大黄素为什么能用pH梯度法分离？