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1、不同来源的桑黄子实体醇提物中黄酮含量及生物活性的比较摘要：用60%的乙醇对7种不同来源的桑黄子实体进行提取，测定了醇提物中的黄酮含量并用HPLC分析其组份，同时采用AlamarBlue法和化学发光法分别对醇提物进行了体外抗肿瘤细胞及抗氧化活性的测定。结果表明，这7个样品的组成成分相似，但含量有差异。各醇提物对体外肿瘤细胞L1210都有抑制作用，对超氧自由基有较强的清除作用，其中Sh2的抗肿瘤细胞和清除超氧自由基的能力明显高于人工火木桑黄Shi,且优于或相当于野生桑黄。？？关键词：桑黄；？A黄酮；？人抗肿瘤；？A抗氧化?？文献标识码：S567.39;R285.5??
2、A桑黄，俗称桑黄菇、桑臣、桑耳等，是一种珍贵的大型药用真菌［1］。桑黄作为药用真菌最早记载于《本草纲目》，传统中医认为桑黄性甘、平，味苦、辛，归肝、膀胱经，用于治疗血崩、血淋、脱肛泻血、带下、闭经、脾虚泄泻等［2］。现代药理学研究表明，桑黄在抗癌、增强免疫以及抗肝纤维化等方面效果显著［3］。目前对桑黄的研究较多集中在深层发酵条件优化⑷、多糖分子结构［5,6］、生物活性［7］等方面，而对桑黄黄酮的研究较少，本文以不同来源的桑黄子实体为材料，对其黄酮的含量、体外肿瘤细胞的抑制率及清除超氧自由基的活性进行了比较，旨在为进一步开发和利用桑黄奠定基础。??1材料与方法□□人
3、工代料栽培火木桑黄（Phellinusigniarius）购于黑龙江省尚志市黑龙江绿源公司（Shi）；人工锻木栽培鲍氏桑黄（Phellinusbaumii）购于安徽金寨（Sh2）；Sh3-Sh7均为野生桑黄，其中Sh3采自安徽金寨；Sh4（寄生于松树）和Sh5（寄生于桦树）采自河南泌阳；Sh6（寄生于松树）和Sh7（寄生于杨树）采自四川成都。??1.2?k约?芦丁标准品由中国药品生物制品鉴定所提供；鲁米诺（luminal,3-氨基邻苯二甲酰月井）为Sigma公司产品；甲醇（色谱纯）为SkChemicals公司产品；超纯水（VivendiWaterSystemsLt
4、d）自制；其余试剂均为国产分析纯。L1210小鼠淋巴白血病细胞来自ATCC（AmericanTypeCultureCollection）,由上海市农科院天然药用资源研究与开发中心传代。细胞培养用试剂为Gibco公司产品。??1.3?屮椒？1.3.1?T继崙铜闹票？将桑黄子实体置50〜55°C烘至八成干，然后剪成小块,再于60°C烘24h后粉碎。准确称取5g桑黄子实体干粉，用60%的乙醇按料液比1：25、室温下超声提取2.0h,过滤，残渣重复上述操作，共提取3次，合并滤液，45°C减压旋转蒸干，备用。??132?巾苜仆?含量的测定以芦丁为标准品，采用NaNO2-AI
5、(NO3)3比色法测定总黄酮含量⑻。？？粗提物得率(％)=醇提物质量/原料质量x100%??粗提物总黄酮含量(％)=样品黄酮质量数X样品稀释倍数/粗提物质量x100%??1.3.3?i；拼继崙铜母卩丝6合卩益?谱(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)分析将桑黄子实体乙醇提取物用甲醇配制成50mg/mL溶液,取1.5mL置于2mLEppendorf管,于9246Xg离心5min,取上清液用Waters高效液相色谱系统(2695HPLCPump,In-lineDegasser,2487Dual入AbsorbanceDete
6、ctor)进行HPLC分析，色谱柱为C??18柱(YMC-packODSAQ,4.6mmX250mm,??5um)；进样量：10uL；流速：0.5mL/min,流动相:A为甲醇，B为l%HAc-H2O,梯度洗脱，柱温：37°C,紫外检测波长280nm,运行时间65min。??1.3.4?i；拼继崙错逋饪7L121O肿瘤细胞活性的测定郝瑞霞，等：不同来源的桑黄子实体醇提物中黄酮含量及生物活性的比较取对数生长期的L1210肿瘤细胞于??129Xg离心3min,去除上清液，用RPMI1640完全培养基稀释至10??4个/mL。取199PL细胞悬液接于96孔板中，然后分别
7、加入1UL浓度为10Pg/mL>20Ug/mL和40Ug/mL的桑黄子实体醇提物样品溶液（样品用二甲基亚砚溶解），以5Ug/mL的5-氟尿喀唏（5-Fu）作为阳性对照，1UL二甲基亚砚为阴性对照，每个样品重复3孔，于5%CO2,37£细胞培养箱中培养72h后，分别于570nm和600nm测定吸光值（SynergyIIHT多功能酶标仪，美国BIO-TEK公司），然后每孔加入20ULAlamarBlue显色剂，再培养6h后于570nm和？?600nm测定吸光值。按照AlamarBlueAssay公式计算细胞增殖率。??细胞抑制率（%）=100%一细胞增殖率（％）。??
8、1.3.5
