牛奶和乳制品中唾液酸的测定

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1、药物分析：姓名：朱文鹏学号：08301010021文章出自：VéroniqueSpichtig,JulienMichaud,SeanAustin，Determinationofsialicacidsinmilksandmilk-basedproducts，AnalyticalBiochemistry405(2010)28–40牛奶和乳制品中唾液酸的测定作者：VéroniqueSpichtig,JulienMichaud,SeanAustin摘要：唾液酸被认为是婴儿牛奶，儿童牛奶和乳制品中的重要成分之一。因此，许多公司都将唾液酸列为其产品成分。为核实其真实性，

2、需要合适的方法进行分析。这项研究的目的就是通过HPLC（高相液相色谱）建立既快速又灵敏的方法来检测N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)和N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)这两种普遍存在的唾液酸。唾液酸在甲酸弱酸性质的水解下从寡糖链，糖蛋白和糖脂中释放出来。然后在1,2-二氨基-4,5-亚甲基二氧苯（DMB）的作用下，发生衍生反应，随后2分钟内可在ZorbaxSB-Aq（安捷伦SB-Aq）快速解析柱中分离。这项方法在多种以牛奶为主的含0.3mg/100g到900mg/100g水平唾液酸的产品和食品中证实有效。同位素示踪实验显示唾液酸的回收率可以达到87%-108%

3、。除一些特例外，其扩大的测量不确定度对Neu5Gc来说一般低于15%，而Neu5Ac或唾液酸的总量则一般低于10%。同时这种方法快速，准确，并且很容易在常规实验室建立依存性分析。研究背景：①唾液酸的简介：唾液酸家族是一类基于神经氨酸结构的碳水化合物，最近将KDN及其衍生物也算作唾液酸家族的一员。到目前为止，已有50种唾液酸被鉴定出来。唾液酸可以在脊椎动物，一些无脊椎动物和一些微生物中被检测到，但好像并不存在于植物和原核生物中。已经有很多实验对唾液酸的生物学功能进行了解释。研究表明，唾液酸可能参与了分子间和细胞间的反应，细胞分化，增殖和癌的发生。它们也可能是细

4、菌和病毒感染致病的重要因素。最近的研究甚至发现唾液酸在学习和记忆中扮演了重要的角色。唾液酸是牛奶的成分之一，作为牛奶中的寡糖成分，可在大脑的发育和保护机制的形成中扮演了重要的角色。②奶制品中唾液酸的情况：Table1：人奶，牛奶和配方奶粉中唾液酸的水平我们已经研究了人奶，牛奶和婴儿配方奶粉中唾液酸的水平（table1）。在人初乳中，唾液酸可以达到2000mg/L，但大约十周后就会降至200-300mg/L。牛初乳（600mg/L）也比成熟牛奶（200mg/L）中唾液酸的水平高，但低于人乳中唾液酸的含量，一些研究证实成熟的牛奶中唾液酸的含量可能会低至10-65

5、mg/L。在不同的牛奶中唾液酸水平的差异非常大。这主要是因为牛的种类，产地或供给的营养等造成的，也有可能是这些因素的综合。现在，对它们的系统研究还没有报道。另外，人奶中唾液酸的主要存在形式是糖蛋白，而牛奶中的主要形式是寡糖。③对奶制品中唾液酸的分析：我们已经研究了人奶，牛奶和婴儿配方奶粉中唾液酸的水平（table1）。在人初乳中，唾液酸可以达到2000mg/L，但大约十周后就会降至200-300mg/L。牛初乳（600mg/L）也比成熟牛奶（200mg/L）中唾液酸的水平高，但低于人乳中唾液酸的含量，一些研究证实成熟的牛奶中唾液酸的含量可能会低至10-65m

6、g/L。在不同的牛奶中唾液酸水平的差异非常大。这主要是因为牛的种类，产地或供给的营养等造成的，也有可能是这些因素的综合。现在，对它们的系统研究还没有报道。另外，人奶中唾液酸的主要存在形式是糖蛋白，而牛奶中的主要形式是寡糖。我们已经有很多分析唾液酸的方法，主要可以分为以下两种：分离法（色谱分析，电泳），不分离法（光谱技术）。一些光谱法的优点在于不需要将唾液酸从结合糖中释放出来，而是将其作为一个整体进行分析，其中使用到的主要试剂有?-二甲氨基苯甲醛-HCL，苔黑酚，间苯二酚/Fe3+，Cu2+/HCL和高碘酸-3-甲基-2-苯并噻唑腙盐酸盐。其他流行的光谱技术，

7、比如：硫代巴比妥酸分析，商业用途的酶联分析，都需要在分析前，将唾液酸从结合糖中分离出来。光谱法的优点在于它们能直接的进行应用，并且所用的仪器并不昂贵。可是有很多成分都会干扰对唾液酸的分析，这是限制它应用于一些复杂的物质的原因。④唾液酸分析前的处理所有基于对唾液酸进行分离的方法，都需要在分析前将唾液酸从结合物中释放出来。我们有两种释放出游离唾液酸的方法：酶水解，酸水解。酶的水解通常需要在温和的条件下进行，这样唾液酸就能以稳定的形式存在，并且不会被修饰。而酶解法的缺点则是不能将其应用于不同类型的唾液酸，同时因为唾液酸结合的分子类型不同，不能使唾液酸100%的从结

8、合物中释放。酸水解的环境较为强烈，唾液酸有可能会在分