luxS基因敲除临床分离大肠杆菌株生物膜形成能力的变化

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1、luxS基因敲除临床分离大肠杆菌株生物膜形成能力的变化孙凤军，枉前，史惠卿，夏培元（400038重庆，第三军医大学西南医院药剂科）［摘要］目的：探讨LuxS基因对临床分离大肠杆菌生物膜形成能力的影响；方法：分别扩增LuxS基因的上下游序列和卡那抗性基因，通过酶切连接的方法构建同源重组质粒，同源重组质粒转化大肠杆菌DH5α扩增后,双酶切获得同源重组片断，采用同源重组的原理构建LuxS基因缺失的临床分离大肠杆菌，96孔板结晶紫染色法分析LuxS基因缺失株生物膜形成能力的变化；结果：成功构建临床分离大肠杆菌LuxS基因缺失株，LuxS基因缺失株生物膜形成能力减弱；结论：LuxS基因对细

2、菌生物膜的形成具有重要调控作用。［关键词］大肠杆菌；LuxS基因；生物膜；基因敲除luxSmutantofclinicalisolateEscherichiacoliexhibitsachangedbiofilmformingcapabilitySunFengjun#WangQianShihuiqingXiaPeiyuan（pharmacydepartmentofSouthwestHospital,400038,chongqingchina）[Abstract]Objective：ToexploreifluxSknock-outmutantofEscherichiacolihav

3、eeffectofbiofilmforming．Methods：TheupstreamsequenceofluxS,kana-resistancegeneanddownstreamsequenceofluxSwereamplifiedbyPCRrespectively,thefragmentandvectorplasmidweretreatedwithrestrictedenzyme,thereafterthehomologousrecombinationplasmidwasfinallymadevialigationenzymeinturn.Homologousrecombin

4、antplasmidwasamplificatedinE.coliDH5α,thenhomologousrecombinanfragmentwasobtainedbyrestrictedenzyme,andtheluxSgeneofclinicalisolatedEscherichiacoliE17wasknockedoutbyhomologousrecombination.screeningofbiofilmwasobservedin96wellplateswithcrystalviolet.Results：ConstructingsuccessfullyluxSmutants

5、train,Comparedwithparentstrain,thebiofilmformingcapabilityofluxSmutantstraindecrease.Conclusion:TheluxSgeneisimportanttoregulatebiofilmformingofEscherichiacoli.[Keywords]Escherichiacoli;luxSgene;Biofilm;geneknock-outSupportedbytheGeneralProgramofNationalNaturalScienceFoundationofChina(3057236

6、6).Correspondingauthor:XiaPeiyuan,Tel:86-23-68754438,E-mail：py_xia@yahoo.com.cnD[基金项目]国家自然科学基金(30572366)[通信作者]夏培元，电话：（023）68754438，E-mail：py_xia@yahoo.com.cn大肠杆菌是临床分离率最高的革兰阴性菌，生物膜感染的常见病原菌，细菌感染形成生物膜后，可以发挥协同作用，形成复杂有序的立体结构，逃避免疫系统攻击，具有较高程度的耐药性，并可在生物膜解离后播散，导致其他系统的感染，生物膜感染的治疗已成为临床亟待解决的难题[1]。研究发现lux

7、S-AI-2是关键的群体感应系统，广泛分布于革兰阳性菌和阴性菌中，可调节链球菌、李斯特菌等菌株生物膜的形成[2-4]，而大肠杆菌luxS-AI-2系统对细菌生长和毒素释放等具有调节作用[5]，为研究luxS-AI-2在大肠杆菌生物膜形成过程中的作用，本研究构建大肠杆菌luxS基因缺失株，并分析其细菌生物膜形成能力的变化。1材料与方法1.1菌株与试剂携有kana抗性基因的pEGFP-N1质粒菌由西南医院烧伤科唐辉博士馈赠；临床分离大肠杆菌E17均为临床药理基地保存菌株。细菌基因组D