金黄色葡萄球菌临床分离株的生物膜形成及相关基因检测

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1、江苏大学硕士学位论文金黄色葡萄球菌临床分离株的生物膜形成及相关基因检测姓名：潘红申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：邵世和20120607江苏大学硕士学位论文摘要目的：检测临床分离的金黄色葡萄球菌生物膜形成情况及其相关基因，构建金黄色葡萄球菌ica同源重组质粒，为研究其生物膜形成机制的奠定基础。方法：1．全自动微生物分析仪法和meCA基因PCR扩增检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床株的耐药分型和基因；2．利用96孔板结晶紫染色法检测临床菌株生物膜形成情况；3．分别采用扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜验证临

2、床菌株生物膜形成；4．PCR法检测金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因ica，sarAa弘及m酗；5．构建金黄色葡萄球菌iCa同源重组质粒。结果：1．92株金黄色葡萄球菌临床株经mecA基因检测出MRSA74株，检出率为80．4％(74／92)，全自动微生物分析仪检测出苯唑西林耐药69株，耐药率为75％，两种检测方法的一致率为94．6％(87侈2)；2．在TSBgIuco-5％培养基中，92株金黄色葡萄球菌临床分离株均可形成肉眼所见的生物膜，其中63株生物膜形成能力较强；3．扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜下分别观察到

3、菌株JB．37生物膜的结构；金黄色葡萄球菌临床分离株的生物膜形成及相关基因检测4．PCR检测结果显示92株实验菌株均具有sarA基因，其中78株具有ica操纵子，88株具有a铲基因，89株具有m酚基因；5．成功构建了金黄色葡萄球菌ica同源重组质粒。结论：金黄色葡萄球菌临床株MRSA的检出率很高，在TSBglu刚％培养基中，金黄色葡萄球菌临床株均可形成肉眼可见的生物膜，但形成能力有不同，iCa操纵子是生物膜形成关键基因，但不含ica基因也可形成’．-l生物膜，提示存在独立于ica以外的途径。92株临床株普遍存在sa

4、rA、a孕和mgrA基因，提示生物膜形成是多基因作用的结果，并可能还有一些未知因素的参与。成功构建了金黄色葡萄球菌ica同源重组质粒。关键词：金黄色葡萄球菌，生物膜，PCR，ica基因，同源重组II江苏大学硕士学位论文ABSTRACTObjec6ve：Detectthebio丘lmfomationandthegenesrelatedtotheformingofbi06lmof&哆咖肠cDc翻s口“陀淞cliIlicalisolation．Thenthehom01090usrecombinationplas血dofi

5、cagenewasconstmctedfromSt印hyloCoccusaureus．Methods：1．DetecttheMRSAusingautomatiCIIlicrobiologysystemandmecAgenePC：Rnlethod；2．DeteCtthebiofilmfo蛐ationofStaphylococcusaureusdiIlicalisolationby96一weUrnjcrDplateassay；3．observethebiofilmmorphousbyscaIlllingelectron

6、microscopyaJldcCInfbCallaserscallllillgmicroscope；4．PCRanalysisofgenes(ica，sar，a鲈andmgrA)relatedtobionlmfo加：ling；5．Constmctthehomologousreconlbinationplas面dofiCainS．aureus．ResuHs：1．OfaU92straillsof＆口“陀淞，74stfajns(80．4％)、№reMRSAdetdCtedbymecA—PCR，aIld69strains(

7、75％)wereMRSAdetectedbyautomatic血crobiologysystem，the俩omethodsshareaCoincidencerateof94．6％；2．～lof92strajnsofS口比陀淞CouldformbiOfilminTSBgluc0．5％medium，63strainsofallcouldfo皿dearandt11ickbiofilm；III3．obseⅣedtllebiofilmInorphousofstrainJB．37withscanIlingeleCtron血Cr

8、osCopyandCoⅢbcallasersca血ng血croscope；4·sarAgenewerefoundinall92isolations，aIldica，a铲，mgrAgenewerein78，88，89strainSrespectively；5．C()nstmCtthehomol090usrecombinationplasIllidofiCain