《高效液相色谱》PPT课件

《《高效液相色谱》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第十七章高效液相色谱法§17-1概述§17-2高效液相色谱仪§17-3液-固色谱法§17-4液-液色谱法§17-5离子交换色谱法§17-6空间排阻色谱法§17-7液相色谱分离类型的选择试题1§17-1概述1.高压：对载液施加15～30MPa，甚至高达50MPa的高压。2.高速：载液流速可达1～10mL·min-1，一般都小于1h。3.高效：可达5000～30000塔板/米。4.高灵敏度：采用高灵敏度检测器，最小检测限可达10-11g。一、高效液相色谱法的特点适用于有机及生化试样的高效分离分析方法。2高效液相

2、色谱流程示意图31.分析对象不同：气相色谱法的分析对象是在柱温下具有足够的挥发性和热稳定性的物质，因此只限于分析气体和沸点较低的化合物及相对分子质量小于400的非离子型化合物；高效液相色谱法对试样的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，能分析相对分子质量大于400的有机化合物。二、高效液相色谱与气相色谱的比较4气相色谱的流动相是惰性的载气，不参与分配过程，它与组分分子没有亲合作用，仅起运载的作用；液相色谱中的流动相（载液）对组分分子有一定的亲合作用，与固定相争夺组分分子，因而增大了分离的选择性。2.

3、流动相不同：53.固定相不同：气相色谱的固定相填料粒度比较粗，常用柱填料目数为60～140目，其颗粒直径为100～250μm，柱效为2000～3000塔板/m，柱长一般为1～3m；高效液相色谱中的柱填料粒度比较细，一般为3～10μm，形状多为球形，柱效为3x104～8x104塔板/m，柱长一般为0.05～0.5m。6（1）液相色谱在室温下操作，较低柱温有利于分离；（2）组分在载液中的扩散系数比在载气中小105倍。（3）载液粘度比载气粘度大102倍，必须采用高入口压。4.操作条件的差异：载液和载气性质不同而造

4、成的差异：7均有吸附色谱和分配色谱，不同的是液相色谱法还可以根据离子交换作用或分子尺寸大小的差异而进行离子交换色谱和空间排阻色谱分离。5.分离机理的异同点：8§17-3高效液相色谱仪2.高压输液泵：选用流速恒定、压力平稳、无脉冲、流量可调节的高压泵输送载液。压力：150～350×105Pa。一、高压输液系统1.贮液器：用来贮存流动相，由玻璃、不锈钢等制成。9进样系统包括进样口、注射器和进样阀等，作用是把分析试样送入色谱柱。耐高压的六通阀进样装置二、进样系统进样方式有注射器进样和阀进样两种。10分离系统包括色

5、谱柱、恒温器和连接管等。三、分离系统发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。装柱技术是获得高柱效的关键因素。高效分离柱的柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（＜20μm）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。11四、检测系统一类是溶质性检测器，仅对被分离组分的物理或物理化学性质有响应；高效液相色谱常用的检测器有两种类型。另一类是总体检测器，对试样和洗脱液总的物理或化学

6、性质有响应。1213包括脱气、梯度洗脱、再循环、恒温、自动进样、馏分收集以及数据处理等装置。梯度淋洗装置利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。五、附属装置梯度洗脱装置：14§17-4吸附色谱法液-固色谱以固体吸附剂为固定相，在其表面具有活性的吸附中心，如硅胶、氧化铝等。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。根据各组分在固定相上吸附能力的不同进行分离。一、分离原理15液-固色谱的固定相吸附剂分为极性和非极性两大类。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝及分子筛等。非极性

7、吸附剂包括活性碳等。较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。二、液-固色谱固定相161.尽量使用高纯度试剂(粘度尽可能小）作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。2.避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。3.试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀。4.当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。5.应与所用检测器相匹配，价格便宜。三、液-固色谱流动相液-固色谱流动相由洗脱剂和调节剂组成。洗脱剂将试样溶解和分离，调节剂用以调节洗脱剂的极性和强度。选择流动相时应注意：17§17

8、-5分配色谱法液-液分配色谱两相都是液体。早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相,现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。流动相与固定相互不相溶，两者之间有一个明显的分界面。由于试样中各组分在两相中的分配系数的差异，使各组分在两相间进行分配。一、分离原理18流动相按组成不同可分为单组分和多组分；按使用方式有固定组成淋洗和梯度淋洗。常用溶剂有：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙