《高效液相色谱》PPT课件(I)

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1、第二十章高效液相色谱法HighPerformanceliquidChromatography(HPLC)120.1概述高效液相色谱法（HPLC）：在经典液相色谱的基础上，引入了气相色谱法的理论和实验方法，采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，发展而成的一种现代液相色谱分析方法。一、HPLC与GC差别二、特点2一、HPLC与GC差别相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主要差别：分析对象的差别和流动相的差别1．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子

2、型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制,分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛占有机物的80%3GC：流动相为惰性气体流动相与组分无亲合作用力，仅起运载作用；组分只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性

3、2．流动相差别4二、HPLC的特点①适用范围广（可分析80%有机化合物，广泛应用于各种药物及其制剂的分析测定）②分离性能好③分析速度快④流动相可选择性范围宽⑤灵敏度高⑥色谱柱可反复使用（与经典色谱相比）⑦流出组分容易收集⑧安全520.2HPLC的分类和基本原理20.2.1HPLC的分类1．按固定相的聚集状态分：液-液色谱法（LLC）和液-固色谱法（LSC）2．按分离机制分：分配色谱吸附色谱离子交换色谱分子排阻色谱化学键合相色谱亲合色谱手性色谱620.2.1基本原理塔板理论速率理论在高效液相色谱中,液

4、体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/u较小，可以忽略不计，即：H=A+B/u+Cu→H=A+Cu故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。经典液相色谱法+气相色谱法液体的粘度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻抗是提高柱效主要途径7采用小粒度、窄分布的球形固定相，均匀装柱。A↓采用低黏度流动相，低流速。C↓，u↓液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。一般恒温操作。H=A+Cu由VanDeemter方程式可以获得HPLC分离条件：820.3各类高效液相

5、色谱法20.3.2液-液分配色谱法根据流动相与固定相极性的差别，可将液-液色谱分为极性小的先流出，适于极性组分分离正相液-液色谱流动相极性<固定相极性反相液-液色谱流动相极性〉固定相极性极性大的先流出，适于弱极性组分分离。例如：含水硅胶为固定相，烷烃为流动相920.3.3化学键合相色谱法固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相：将固定液的官能团通过化学反应键合到硅胶表面上，而构成化学键合相。1.反相键合相色谱法（RBPC或RHPLC）采用非极性或极性较小的键合固定相和极性流动相组

6、成的色谱体系。固定相：常用十八烷基硅烷键合相（ODS或C18）流动相：常用甲醇-水或乙腈-水10适用：非极性~中等极性组分应用最广，可解决80%的HPLC问题流动相的极性与容量因子的关系流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑出柱顺序：极性大的组分先出柱极性小的组分后出柱112.正相键合相色谱法（1）固定相：极性大的氰基或氨基键合相（2）流动相：而以非极性或极性小的溶剂（如烃类）中加入适量的极性溶剂（如氯仿、醇等）为流动相。例：正己烷+氯仿-甲醇，氯仿-乙醇（3）分离极性化合物，极性强的组分后洗脱

7、出柱（4）流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓以极性的有机基团，如氰基(-CN)、氨基(-NH2）或双羟基等键合在载体表面，作为固定相。12正相色谱低极性流动相反相色谱高极性流动相中等极性流动相中等极性流动相时间时间时间时间待测物极性：A>B>C正、反相色谱中极性和保留时间的关系13B+H+↔BH++RSO3Na↔RSO3-+Na+↕[BH+·RSO3-]

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17、[BH+·RSO3-]3.反相离子对色谱（RPIC）（1）分离机理以分析碱类物质B为例流动相固定相（PICB）中性离子对

18、14（2）常用离子对试剂烷基磺酸钠→分析碱（正电荷）四丁基季铵盐→分析酸（负电荷）a．与流动相的极性有关（同反相色谱）b．与R的链长有关：R↑长，极性↓，k↑，tR↑（3）影响k的因素（4）适用：有机酸、碱、盐，离子型和非离子型化合物的混合物。在药物分析中应用很广154.离子抑制色谱（ISC）在反相色谱法中，通过调节流动相的pH，抑制样品组分的解离，增加它在固定相中的溶解度，以达到分离有机弱酸、弱碱的目的，称为离子抑制色谱法（ISC）（1）适用范围弱酸3.0≤pKa≤