高效液相色谱ppt课件.ppt

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1、17高效液相色谱主要内容§1概述§2高效液相色谱仪§3高效液相色谱法的类型§4应用§1概述一、HPLC与经典LC的比较高速HPLC只需数分钟;而经典LC完成一次分析需时数小时。高效HPLC柱效很高;可以在数分钟内完成数百种物质的分离。灵敏度高检测器灵敏度极高：UV—10-9g,荧光检测器—10-11g。§1概述二、HPLC与GC的比较分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，占有机物总数的20%；HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。§1概述二、HPLC与GC的比较流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”

2、气体，对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，可通过溶剂来控制和改进分离。§1概述二、HPLC与GC的比较操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。§2高效液相色谱仪仪器结构示意见下图，分为4个主要部分：高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。§2§2高效液相色谱仪§2高效液相色谱仪一、高压输液系统它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。§2§2高效液相色谱仪一、高压输液系统1

3、、贮液罐2、高压泵3、梯度洗脱装置§2§2高效液相色谱仪1、贮液罐贮液罐为不锈钢、玻璃或氟塑料制成的容器，容量为0.5~2L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。溶剂使用前，必须先脱气。脱气方法：低压脱气、超声脱气、吹氦气脱气等。§2§2高效液相色谱仪2、高压泵高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，是流动相的动力源。要求：流量稳定、输出压力高、流量范围宽、耐酸碱和缓冲液的腐蚀、压力变动小、空间小、易于清洗和更换溶剂、具有梯度洗脱功能。§2§2高效液相色谱仪2、高压泵类型：恒压泵、恒流泵两大类，多使用恒流泵。往复柱塞泵是目前使用最广泛的一种恒流泵；由偏心轮带动活塞往复移动，

4、恒流输出，并通过改变电机转速调节流量。§2§2高效液相色谱仪§2播放§2高效液相色谱仪3、梯度洗脱装置梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。§2§2高效液相色谱仪3、梯度洗脱装置1）低压梯度（外梯度）装置，流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。2）高压梯度（内梯度）装置，先将两种溶剂分别用泵增压后，再由泵按程序压入混合室，混合，再注入色谱柱。§2§2高效液相色谱仪二、进样系统进样系统包括进样口、注射器和进样阀等，它

5、的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。要求：重复性好、死体积小、保证柱中心进样、流量波动小、便于实现自动化§2§2高效液相色谱仪1、进样器进样优点：可柱头进样，减小死体积，充分发挥柱的效能，简单便宜。缺点：是高压进样时漏液．会产生误差，隔垫使用次数有限，进样量小，重复性差。§2§2高效液相色谱仪2、六通阀进样目前，广泛采用六通进样阀，它可以承受很高的压力，由于进样量是由进样定量管决定的，因此，可以获得好的重复性，更换不同体积的进样定量管，可调整进样量。§2§2高效液相色谱仪§2§2高效液相色谱仪三、色谱分离系统色谱柱包括柱管和固定相两部分固定相的要求：柱效高、选择性好

6、、分析速率快粒度一般为2，5，7，10μm，理论塔板数每米16万~5万§2§2高效液相色谱仪四、检测系统在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是通用型检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应。另一类是选择性检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应。§2§2高效液相色谱仪1）紫外检测器：应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。§2§2高效液相色谱仪§2§2§2高效液相色谱仪2）二极管阵列检测器§2高效液相色谱仪§2§2高

7、效液相色谱仪3）荧光检测器灵敏度高，选择性好，可用于梯度洗脱。§2§2高效液相色谱仪4）电化学检测器电导检测器安培检测器§2§3高效液相色谱法的类型一、HPLC的固定相和流动相二、液固吸附色谱法三、液液分配色谱四、化学键合相色谱法五、离子交换色谱六、凝胶色谱法§3§3高效液相色谱法的类型一、HPLC的固定相和流动相1.固定相高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为：刚性固体和硬胶固定相按孔隙深度分类可分为：表面多孔型和全多孔型固定相§3§3高效液相色谱法的类型一、HPLC的固定相和流动相1.固定相