常用western blot 试剂配方

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1、Westernblot常用试剂配方1.丙烯酰胺-双丙烯酰胺储存液：30%AB（100ml）丙烯酰胺29g双丙烯酰胺1g加蒸馏水至100ml，过滤，棕色瓶保存。2.10%SDS：（10ml）电泳级SDS1g蒸馏水9ml初始PH约为7.85，用针尖蘸少许浓盐酸调PH至7.2，定容至10ml。3.TEMED（四甲基乙二胺）（成品）4.Lower-buffer（1.5MTris-ClPH8.8）：50mlTris-base9.085g蒸馏水45ml加浓盐酸（约0.4ml）调PH至8.8后定容至50ml，4℃保存。5.upperbuffer（1.0MTris-Cl，PH6.8）：50mlTris-b

2、ase6.055g蒸馏水44ml加3.5ml浓盐酸调PH至6.8后定容至50ml，4℃保存。6.10%过硫酸铵（10%AP）：0.5ml新鲜配制称取0.05gAP于1.5mlEP管中，储存于-20℃，用时溶于0.5ml蒸馏水7.5×loadingbuffer：（1ml）50mlupperbuffer0.312ml15.6ml甘油（丙三醇）0.5ml25mlSDS0.1g5gDTT0.0385g溴酚蓝0.005g0.25g加蒸馏水溶解后定容至1ml。取0.2ml加0.8ml蒸馏水配成工作液。8.5×runningbuffer：（1000ml）Tris-base15.1g甘氨酸（Glycine

3、）94gSDS5g加蒸馏水溶解后定容至1000ml。用时加4000ml蒸馏水。9.考马斯亮蓝染液：100ml（可重复利用）甲醇30ml冰乙酸10ml蒸馏水60ml考马斯亮-2500.05g10.考马斯亮蓝脱色液500ml：现用现配乙酸（10%）50ml甲醇（30%）150ml加蒸馏水定容至500ml。11.Transbuffer（PH8.5）：100ml现用现配Tris-base0.3028g甘氨酸1.4872g甲醇20ml加蒸馏水定容至100ml。12.10x丽春红染液（储存液）：（可重复利用）（用时用蒸馏水稀释为1X的）染色后用纯水脱色丽春红                      

4、   2g三氯乙酸                      30g磺基水杨酸                    30g加H2O 定容至10ml（储存液）。4℃保存。用1×TBST洗脱13.10×TBS：500mlTris-base12.1gNaCl40g加浓盐酸5ml调PH至7.6，加蒸馏水定容至500ml（储存液）。4℃保存。用时蒸馏水稀释为1×TBS（1份10×储存液，9份水）.14.1×TBST（加Tween-20的TBS）洗涤液：Tween-20含量0.05%15.封闭液：含5%脱脂奶粉的TBST脱脂奶粉1g1×TBST20ml16.ECL发光底物：两种溶液1:1混合，均匀涂

5、于膜上。17.H202配制取普通纯水按照每10ml纯水加入40μl30%H2O2比例配成新鲜H2O2溶液替代ECL溶液B使用