western blot试剂配方

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1、SDS-PAGE相关试剂、缓冲液的配置方法1.5MTris-HCl组分浓度：1.5M配制量：200ml配制方法：1.称量下列制剂，置于250ml蓝口瓶中。Tris-base36.33g2.向烧杯中加入约150ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.调pH=8.8(在磁力搅拌器上进行)，定容至200ml，4℃保存1.0MTris-HCl组分浓度：1.0M配制量：200ml配制方法：1.称量下列制剂，置于250ml蓝口瓶中。Tris-base24.22g2.向烧杯中加入约150ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.调pH=6.8(在磁力搅拌器上进行)，定容至200ml，4℃保存1.0MTris-HCl组

2、分浓度：1.0M配制量：200ml配制方法：1.称量下列制剂，置于250ml蓝口瓶中。Tris-base24.22g2.向烧杯中加入约150ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.调pH=7.5(在磁力搅拌器上进行)，定容至200ml，4℃保存10%SDS（W/V）组份浓度：10%（W/V）SDS配置量：200ml配制方法：1.称取2gSDS。2.加入200ml的去离子水后搅拌溶解。注意：溶解定容SDS时不宜剧烈摇晃，避免产生过多的泡沫；10%SDS溶液在低温是易析出晶体，可以置于70℃溶解。30%（W/V）丙烯酰胺组份浓度：30%（W/V）Acrylamide配制量：200ml配制方法：1.称

3、量下列制剂，置于1L烧杯中。丙烯酰胺58gN-N亚甲基双丙烯酰胺2g2.向烧杯中加入约150ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至200ml，用定性滤纸滤去杂质。4.于棕色瓶中4℃保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。10%APS（W/V）组份浓度：10%（W/V）过硫酸铵配置量：1ml配制方法：1.称取0.1g过硫酸铵。2.加入1ml的去离子水后搅拌溶解。3.贮存于-20℃注意：10%过硫酸铵溶液在-20℃保存时可使用2周左右，超过期间会失去催化作用。

4、5×电泳缓冲液组份浓度：0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%(W/V)SDS配置量：1L配制方法：1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。Tris15gGlycine72gSDS5.0g2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。3．加去离子水将溶液定容到1L后，4℃保存。转印缓冲液组份浓度：0.125MTris,1.25MGlycine,配置量：1L配制方法：1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。Tris3gGlycine14.4g甲醇200ml2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。3．加去离子水将溶液定容到1L后，室温保存。考马氏亮蓝染色液组份浓度：0.25%（W/V）考马

5、氏亮蓝45%（V/V）甲醇10%（V/V）冰乙酸配制量：100ml配制方法：1.称量0.25g考马氏亮蓝，置于烧杯中2.量取45ml的甲醇加入上述烧杯，搅拌溶解3.加入10ml乙酸，搅拌均匀。4.加入45ml去离子水，搅拌均匀。5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存考马氏亮蓝脱色液组份浓度：10%（V/V）冰乙酸45%（V/V）甲醇配制量：100ml配制方法：1.称量下列溶液，置于烧杯中冰乙酸10ml甲醇45ml去离子水45ml2.充分混匀后使用5×上样缓冲液配置量：10ml配制方法：1.称量下列试剂，置于100ml血清瓶中。1MTris-HCl(pH=6.8)0.6ml甘油2.5ml10%S

6、DS2ml巯基乙醇0.5ml溴酚蓝0.01g去离子水4.4ml2.混匀后1ml分装于指形管中，-20℃保存。TBST组份浓度：配制量：1L配制方法：1.称量下列制剂，置于1L烧杯中。1MTris-HCl(pH=7.5)：10mlNaCl：5.8g2.加去离子水将溶液定容至1L。3.加500μlTween-20，磁力搅拌器混匀。