《基因工程3受体》PPT课件

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1、1、大肠杆菌受体系统①基因复制原核细胞2、芽孢杆菌受体系统扩增场所受体系统3、其他细菌受体系统②外源基因表达场所1、酵母菌受体系统真核细胞2、哺乳动物细胞受体系统受体系统3、植物细胞受体系统受体(宿主)Host:能支持质粒,病毒进行复制的生物体。受体系统一基因工程的基本元件------受体一、E.coli受体系统大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的1、E.coli受体系统的特点①遗传背景清楚②繁殖快③含有质粒3、E.coli受体系统的缺点表达产物存在于细胞内安全性欠佳缺乏基因产物表达后加工机制基因型：F-endA1glnV44thi-1

2、recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取。DH5α菌株基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选

3、。用途：分子克隆、质粒提取。JM109菌株基因型：F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。特点：该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)菌株ompT=mutationinoutermembraneproteinproteaseVII,reducingproteolysisofexpressedpr

4、oteins基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达BL21(DE3)ply菌株四、酵母菌受体系统食品级真核单细胞微生物适合于真核基因表达基因产物外分泌遗传背景较清楚具基因表达后加工机制1.酵母菌受体系统的特点2.常用酵母菌受体系统酿酒酵母甲醇酵母酿酒酵母酿酒酵母（Saccharomycesserevisiae）又名面包酵母，它是单

5、细胞真核微生物，一直以来酿酒酵母被称为真核生物中的“大肠杆菌”。1.酿酒酵母表达系统表达外源基因的优点：工艺简单，可快速大规模生产；它不会产生毒素，安全可靠。适合于表达真核生物基因；外源基因可在酿酒酵母中分泌表达酿酒酵母的遗传背景清楚，容易进行遗传操作。2.毕氏酵母受体系统的优点：含特有的AOX（醇氧化酶基因）启动子，用甲醇可以严格地调控表达。毕氏酵母（甲醇酵母）