基因工程受体ppt课件.ppt

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1、第四章基因工程的受体系统1、大肠杆菌受体系统①基因复制原核细胞2、芽孢杆菌受体系统扩增场所受体系统3、其他细菌受体系统②外源基因表达场所1、酵母菌受体系统真核细胞2、哺乳动物细胞受体系统受体系统3、植物细胞受体系统受体(宿主)Host:能支持质粒,病毒进行复制的生物体。受体系统1一、E.coli受体系统大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的21、E.coli受体系统的特点①遗传背景清楚—利于研究②繁殖快—易于获得大量基因产物③含有质粒—利于基因转移④表达非E.coli

2、基因，其潜力几乎是无限的342、E.coli受体系统的优点①遗传背景清楚—利于研究②繁殖快—易于获得大量基因产物③含有质粒—利于基因转移④表达非E.coli基因，其潜力几乎是无限的53、E.coli受体系统的缺点①高水平表达的基因产物易发生沉淀，凝聚，不易折叠，无生物活性②基因产物纯化工艺复杂（大海捞针）③基因产物受污染（内毒素）④基因产物对受体菌有毒害作用⑤基因产物易被水解⑥从安全角度—并不理想⑦缺乏基因产物表达后加工机制6基因型：endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV4

3、4F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZ)M15]hsdR17(rK-mK+)。特点：具有四环素抗性和萘啶酮酸抗性。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。用途：分子克隆和质粒提取。Xl1-Blue菌株endA1=eliminationofnon-specificdigestionbyEndonucleaseIrecA1=ForreducedoccurrenceofunwantedrecombinationinclonedDNA7基因型：F–ompTgaldcmlon

4、hsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。特点：该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)菌株ompT=mutationinoutermembraneproteinproteaseVII,reducingproteolysisofexpressedprotei

5、ns8基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达BL21(DE3)ply菌株9基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特点：

6、一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH5α菌株10基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株

7、11基因型：F-，mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU，galK，rps，(Strr)endA1，nupG用途：高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。TOP10菌株12第三节基因工程的受体系统1、大肠杆菌受体系统原核细胞2、芽孢杆菌受体系统受体系统3、其他细菌受体系统1、酵母菌受体系统真核细胞2、哺乳动物细胞受体系统受体系统3、植物细胞受体系统受体系统13二、枯草杆菌受体系统芽抱

8、杆菌是一类耐高温、高压及低pH值的有益微生物141、枯草杆菌（Bacillussubtilis）受体系统特点①最大优点：外分泌②高水平表达，基因产物不发生沉淀③纯化基因产物相对简单④基因产物污染少⑤基因产物不易被水解⑥安全⑦遗传背景仅次于E.coli2、缺点：①转化效率相对较低②表达水平较低151.乳酸杆菌受体系统的独特优势:乳酸杆菌是食品级微生物乳酸杆菌本身分泌蛋白较少