[整理]基因工程-4-受体教学讲义PPT课件.ppt

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1、基因工程-4-受体一、E.coli受体系统大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的1、E.coli受体系统的特点①遗传背景清楚—利于研究②繁殖快—易于获得大量基因产物③含有质粒—利于基因转移④表达非E.coli基因，其潜力几乎是无限的基因型：endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZ)M15]hsdR17(rK-mK+)。特点：具有四环素抗性和萘啶酮酸抗性。recA1和e

2、ndA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。用途：分子克隆和质粒提取。Xl1-Blue菌株endA1=eliminationofnon-specificdigestionbyEndonucleaseIrecA1=ForreducedoccurrenceofunwantedrecombinationinclonedDNA基因型：F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。特点：该菌株用于以T7RN

3、A聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。BL21(DE3)菌株ompT=mutationinoutermembraneproteinproteaseVII,reducingproteolysisofexpressedproteins基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。特点：该菌株带有

4、pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达BL21(DE3)ply菌株基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α

5、互补，可用于蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH5α菌株基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株基因型：F-，mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74

6、，recA1，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU，galK，rps，(Strr)endA1，nupG用途：高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。TOP10菌株第三节基因工程的受体系统1、大肠杆菌受体系统原核细胞2、芽孢杆菌受体系统受体系统3、其他细菌受体系统1、酵母菌受体系统真核细胞2、哺乳动物细胞受体系统受体系统3、植物细胞受体系统受体系统二、枯草杆菌受体系统芽抱杆菌是一类耐高温、高压及低pH值的有益微生物1、枯草杆菌（Bacillussubtilis）受体系统特

7、点①最大优点：外分泌②高水平表达，基因产物不发生沉淀③纯化基因产物相对简单④基因产物污染少⑤基因产物不易被水解⑥安全⑦遗传背景仅次于E.coli2、缺点：①转化效率相对较低②表达水平较低1.乳酸杆菌受体系统的独特优势:乳酸杆菌是食品级微生物乳酸杆菌本身分泌蛋白较少,Usp45是迄今已知乳酸杆菌分泌的唯一可检测蛋白,减少了载体微生物的自身蛋白对外源分泌蛋白的干扰乳酸杆菌不产生任何细胞外蛋白酶,不会引起分泌蛋白发生细胞外的降解。三、乳酸杆菌受体系统2.乳酸杆菌作为疫苗载体的优越性：在呼吸系统、消化系统、泌

8、尿系统定植,对维持微生态平衡很重要。在发酵食物中应用了几个世纪,被认为是安全的有益微生物。免疫方便、便宜、安全,不需要注射无免疫原性四、酵母菌受体系统安全性更大遗传信息和生理状况更适合于真核基因表达基因产物外分泌遗传背景较清楚具基因表达后加工机制1.酵母菌受体系统的特点2.常用酵母菌受体系统酿酒酵母甲醇酵母酿酒酵母酿酒酵母（Saccharomycesserevisiae）又名面包酵母，它是单细胞真核微生物，一直以来酿酒酵母被称为真核生物中的“大肠杆菌”。