《高效液相》PPT课件

《《高效液相》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第十章高效液相色谱分析法一、高效液相色谱仪HPLC二、高效液相色谱法的特点featureofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第一节高效液相色谱的特点与仪器highperformanceliquidchromatographfeatureandinstrumentofHPLC2021/8/4第一节高效液相色谱的特点与仪器与经典液相色谱法比较与气相色谱法比较高效液相色谱的特点2021/8/4高效液相色谱(HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱方法。按照固定相不同可分为：液液分配

2、色谱；吸附色谱(液固色谱)；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝胶渗透色谱)。早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm,长50~500cm的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在150~200m范围内。即使这样，流速仍然很低(<1mL/min)，分析时间仍然很长！2021/8/4当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减少，但柱塔板高度Hmin也相应增加了！或者说柱效下降了。为了解决分析时间及柱效问题，人们认识到：最为有效地增加柱效的唯一方法是减小填充物的粒径（3~10m）！直到60年代，由于

3、在高压下操作的液压设备、高效固定相以及高灵敏检测器的出现及发展，才彻底解决了分析时间及柱效的问题。即所谓的高效液相色谱技术才真正得到广泛应用。2021/8/41.高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV—10-9g,荧光检测器—10-11g。2021/8/4色谱柱:柱长/cm10~2510~2

4、00柱内径/mm2~1010~50固定相粒度:粒径/m5~5075~600筛孔/目2500~300200~30色谱柱入口压力/MPa2~200.001~0.1色谱柱柱效/(理论塔板数/m)2103~51042~50进样量/g10-6~10-21~10分析时间/h0.05~1.01~20高效液相色谱法经典液相(柱)色谱法项目高效液相色谱法与经典液相(柱)色谱法的比较2021/8/42.HPLC与GC的比较分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质只点有机物总数的20%；HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不

5、稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。2021/8/4流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。2021/8/4有机溶剂或一定pH值的缓冲溶液按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较吸附色谱分配色谱离子色谱体积排阻色谱全多孔固体吸附剂固定液+载体高效微粒离

6、子交换剂不同孔径的多孔性凝胶固定相流动相分离原理平衡常数不同极性有机溶剂不同极性有机溶剂和水不同pH值的缓冲溶液吸附系数(KA)分配系数(KP)选择性系数(KS)分布系数(KD)吸附解吸溶解挥发可逆性的离子交换多孔凝胶的渗透或过滤方法项目第一节高效液相色谱法概述高效液相色谱的分类2021/8/4高效液相色谱的应用范围和局限性应用范围高沸点不易挥发，受热不稳定易分解，分子量大，不同极性的有机物，生物活性物质及天然产物，化工产品及环境污染物等等。方法局限性：使用多种溶剂，成本高，且易产生污染，梯度洗脱比气相色谱的程序升温复杂缺少通用的检测器分

7、析具有多种沸程的石油产品，不能替代气相色谱法也不能代替中、低压液相色谱法，尤其对受压易分解的生物活性样品2021/8/4一、液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph2021/8/4液相色谱仪（2）2021/8/4液相色谱仪（3）2021/8/4液相色谱仪（4）2021/8/4二、高效液相色谱法的特点featureofHPLC特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2021/8/4三、流程及主要部件processandmainassemblyofHPLC1.流程2021

8、/8/42.主要部件(1)高压输液泵主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速