总黄酮、多酚含量的测定

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1、总黄酮含量的测定一、仪器紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个二、药品芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH500g三、实验步骤（一）、标准曲线绘制1.芦丁标准品40mg置于称量瓶中80℃烘干至恒重，取烘干后的20mg芦丁标准品用水定容至100mL,得200µg/mL芦丁标准贮备液，精确量取上述浓度芦丁标准贮备溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2

2、.0mL分别置于10mL具塞试管中。2.向具塞试管中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、3.8、3.4、3.0mL。3.然后加5％亚硝酸钠0.3mL，摇匀，静置6min。4.再加10％硝酸铝0.3mL，摇匀，静置6min。5.加4％氢氧化钠4.0mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12min。6.于510nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。研究表明芦丁标准品含量在0～0.5mg范围内与吸光度具有良好的线性关系。（二）、样品处理及总黄酮的提取（以60%乙醇提取为例）1.将样品在80

3、℃烘干24h，粉碎后过80目筛置于干燥器中备用。2.称取500±2mg样品于25mL具塞三角瓶中，使样品位于三角瓶底部（重复3次）。3.每瓶加4mL60％乙醇，放超声波提取器提取2h。提取液转至10mL具塞离心管中。4.再向具塞三角瓶中加4mL的60％乙醇，放超声波提取器提取1h，提取液转至相应10mL具塞离心管中，6000r/min离心10min，离心后取上清液于相应的10mL具塞试管中。60％乙醇定容至10mL，待测。（三）、样品提取液总黄酮含量的测定准确吸取总黄酮提取液（稀释适当倍数）2.0mL于10mL具塞试管中，加入60％乙醇3

4、.0mL,然后按步骤一中（3,4,5,6）的方法测定吸光度，试剂空白为参比（提取溶剂代替提取液），将吸光度代入标准曲线计算样液的总黄酮含量。总酚含量的测定一、仪器紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、超声波提取器、回流装置、10mL具塞试管、25mL具塞三角瓶、250mL容量瓶二、药品没食子酸标准品100mg、无水碳酸钠500g、福林酚试剂100mL三、实验步骤（一）、标准曲线绘制精确称量没食子酸标准品25mg，用水溶解后定容于250mL容量瓶中，得到0.1mg/mL的标准贮备溶液。分别移取没食子酸标准储

5、备溶液0.00、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50mL置于10mL具塞试管中，分别加入福林-酚试剂1mL，摇匀后再分别加入质量分数12%Na2CO3溶液2mL，用水定容至10mL，摇匀。平行三组。室温下避光反应1h后，在765nm波长下测定吸光度。以没食子酸标准溶液的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，制作标准曲线，研究表明，没食子酸含量在20～120μg范围内与吸光度具有良好的线性关系。（二）、样品总酚的提取以及样品总酚含量的测定（以60%乙醇提取为例）称取0.5g粉碎的样品于25mL具塞三角瓶中，加入10mL体积分

6、数60%的乙醇溶液，搅拌均匀，在超声波提取器中75℃提取50min。提取液以3000r/min离心20min，取上清液，量取提取液体积，采用福林-酚比色法测定样品提取液的总多酚浓度。吸取1.00mL总多酚提取液（稀释适当倍数）于10mL具塞试管中，分别加入福林-酚试剂1mL及质量分数为12%的碳酸钠溶液2mL并用60%乙醇定容至刻度，在室温下避光反应1h，在765nm波长处测定样品的吸光度，试剂空白为参比（提取溶剂代替提取液），并根据工作曲线来计算提取液中总多酚含量。