总黄酮含量测定方案

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1、总黄酮含量测定一样品溶液的制备70%乙醇溶液，料液比1﹕8，80度下回流2h。取10g样品放入圆底烧瓶中加入80ml70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。二芦丁标准品的配置精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。制得浓度为0.2mg/ml芦丁标准品溶液。三显色方法的确定1扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至25ml，空白对照，全波扫描。2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸钠溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中)1ml,摇匀，放置6min，

2、加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中)1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml,再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min，空白对照，全波扫描bb。3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。4氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分

3、摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml,摇匀，空白对照，全波扫描。四显色条件的确定五标准曲线的绘制分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定吸光度，绘制标准曲线。六精密度实验按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。次数12345吸光度平均值相对标准偏差RSD（%）七重现性实验取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。次数12345总黄酮含量（%）平均值（%）相对标准偏差RSD（%）八稳定性试

4、验取制备好的同一样品溶液，将其显色后每10min测定一次，共测定7次，记录吸光度并计算总黄酮含量。比色时间(min)0102030405060总黄酮含量（%）平均值相对标准偏差RSD（%）九回收率实验分别准确量取已知总黄酮含量为mg/ml的1ml提取液5份，分别加入一定量芦丁标准品，按上述方法进，测定吸光度，计算黄酮含量，根据回收率公式计算出加样回收率。回收率=（混合后测得量—样品中总黄酮含量）/芦丁标准品加入量*100样品号样品中总黄酮含量（mg）芦丁加入量（mg）测定量（mg）回收率（%）平均回收率（%）相对标准偏差RSD（%）12345十样品含量测定分别取3份样品溶液各

5、1ml,按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。