甘草总黄酮含量测定方法研究

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1、甘草总黄酮含量测定方法研究【摘要】目的选择适宜的对照品，建立能够准确测定甘草中总黄酮含量的方法。方法针对甘草苷、柚皮苷、芦丁3种对照品分别使用紫外分光光度法，通过全波长扫描，比较不同对照品和样品与显色前后的最大吸收波长，从而确定适合的对照品。结果甘草苷对照品和样品液经过碱处理后最大吸收波长分别为334，334.5nm且全波长扫描后得到峰形基本一致，而柚皮苷对照品经过相同处理后最大吸收波长在419.5nm，芦丁对照品和样品分别经过Al2（NO3）3-NaOH-NaNO2显色后最大吸收波长在510nm和363nm。通过对3种方法

2、的测定结果进行统计学分析，以甘草苷为对照品的测定结果分别与另外两种方法差异显著。结论选用甘草苷为对照品应用于紫外分光光度法测定甘草总黄酮成分准确度较高，是切实可行的含量测定方法。【关键词】甘草黄酮紫外分光光度法　　Abstract:ObjectiveToselecttheappropriatestandardfordeterminationofflavonoidsinGlycyrrhiza.MethodsToparethelargestabsorptionetry.ResultsStandardLiquiritinandsa

3、mplesprocessedbyalkalihadthelargestabsorptionatthe334nmand334.5nminecontentofflavonoidsinglycyrrhizaetrybystandardLiquiritinisapracticalmethodetry甘草中的黄酮类成分包括黄酮类、二氢黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、查尔酮类和双黄酮类［1］化合物，其中以二氢黄酮类和查尔酮类含量较高［2］。二氢黄酮类包括：甘草苷(liquiritin)、甘草苷元(liquiritigenin)、新甘草苷(n

4、eoliquiritin)、甘草素（liquiritigenin）等，查尔酮类包括：异甘草苷(isoliquiritin)、异甘草素（isoliquiritigenin）、异甘草苷元(isoliquiritigenin)、新异甘草苷(neoisoliquiritin)等［3～7］。而其中比例较大的成分以甘草苷为主［8］。甘草总黄酮的测定常用芦丁［9～10］、柚皮苷［11～13］为对照品通过紫外分光光度法进行测定，而《中国药典》中甘草项下没有规范总黄酮成分含量的测定方法［14］，导致甘草总黄酮成分有多种不同的测定方法。本实验研

5、究通过对不同测定方法进行考察，比较不同对照品和样品采用相应方法显色后的最大吸收波长，对3种对照品相应测定结果分析，确定最适宜甘草总黄酮含量测定的对照品和测定方法。　　1器材　　1.1仪器HITACHIU-2000Spectrophotometer。　　1.2样品甘草生药样品由北京中医药大学王文全教授提供和鉴定,全部为甘草GlycyrrhizauralensisFisch（样品按来源依次编号为1.杭锦旗1年生；2.杭锦旗2年生；3.杭锦旗3年生；4.杭锦旗4年生；5.杭锦旗5年生；6.新疆乌苏3年生；7.杭锦旗野生；8.杭锦旗

6、野生横生茎；9.甘肃金塔野生；10.宁夏盐池野生；11.甘肃酒泉野生；除杭锦旗野生横生茎外其余10份样品均为根）。　　1.3试剂供含量测定用甘草苷（编号：111610）、柚皮苷（编号：110722）：中国药品生物制品检定所；芦丁对照品由北京中医药大学马长华教授制备；氢氧化钾(ＡＲ)、甲醇(ＡＲ)、硝酸铝（AR）、亚硝酸钠（AR）、氢氧化钠（AR）。　　2方法　　2.1对照品溶液的制备精密称定甘草苷、柚皮苷、芦丁标准品适量,用甲醇溶解,分别定容于25，10，10ml容量瓶中,制得浓度为0.07504ｇ·Ｌ-1的甘草苷对照品溶液

7、、0.968ｇ·Ｌ-1的柚皮苷对照品溶液和1.003ｇ·Ｌ-1的芦丁对照品溶液。　　2.2样品的提取取甘草粉末适量,精密称定,加甲醇50ml,称重,（250in,称重,补足损失重量,过滤,收集续滤液,即得。　　2.3测定方法　　2.3.1甘草苷为对照品的测定方法精确吸取提取液0.5ml,加入1ml甲醇,其中一份加入10%ＫＯＨ溶液0.5ml显色,室温放置5min,用甲醇稀释至10ml，以相应溶剂为空白，在λ334nm处测定吸收度。　　2.3.2柚皮苷为对照品的测定方法供试液制备同“2.3.1”项，在波长419nm处测定吸收度

8、。　　2.3.3芦丁为对照品的测定方法精确吸取提取液0.5ml，加3ml蒸馏水，5%亚硝酸钠溶液0.5ml放置6min，加10%硝酸铝溶液0.5ml，混匀后放置6min，加5%氢氧化钠2.5ml混匀，放置15min后蒸馏水定容至10ml。以相应溶剂为空白，在波长510nm处测定吸收度。