甘草中甘草苷的含量测定方法研究

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1、甘草中甘草苷的含量测定方法研究李翠徐必学张永萍梁光义【摘要】目的改进2005年版《中国药典》Ⅰ部甘草项下甘草苷的含量测定方法。方法对甘草中甘草苷的提取方法进行了正交优选，并与药典方法进行了比较。结果最佳提取方法为用药材250倍体积的0.3%氨水，80℃水浴回流30min，含量测定结果高于2005年版《中国药典》Ⅰ部项下甘草中甘草苷测定方法30%～50%。结论该方法能够准确地测定甘草中甘草苷的含量。【关键词】甘草甘草苷含量测定正交实验甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch．，胀果甘草Glycyrrhiz

2、ainflataBat．或光果甘草GlycyrrhizaglabraL．的干燥根及根茎，有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效〔1〕。甘草苷作为甘草中的主要有效成分之一，2005年版《中国药典》（简称药典）新增了其HPLC含量测定方法。作者在实验中发现回流法提取甘草苷的提得率明显高于2005年版药典中采取的超声法，因此本研究对甘草苷含量测定前样品提取方法进行了正交优选，建立了其相对稳定可靠的含测方法。　　1仪器与材料　　1.1仪器岛津LC-6AD高效液相色谱系统（岛津公司），TDA-8002电热恒温水浴锅（余姚市

3、东方电工仪器厂），KQ300DA型数控超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。　　1.2试药甘草苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号111610-200503)；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯；甘草分别购于北京同仁堂贵阳分店、贵阳海健医药有限公司，经贵阳中医学院王世清教授鉴定，粉碎（过三号筛)，备用。　　2方法与结果　　2.1色谱分析条件色谱柱为HPhypersilC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙腈-0.1%醋酸（20∶80）；流速0.8ml·min-1；检测波长276nm；柱温为室温；进样体积

4、10μl。对照品及样品分离的色谱图见图1。　　2.2对照品溶液的制备取甘草苷对照品5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。　　2.3提取方法的选择取同一甘草粉末约0.2g（6份），精密称定，分别置于6个50ml具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇10ml，称定重量，2份直接超声30min（2005年版药典方法），2份浸泡12h后超声30min，2份水浴回流30min，放冷，补足重量，静置。取上清液1ml，置5ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按上述色谱条件进行测定，含量分别

5、为0.84%，0.84%，0.91%，结果显示水浴回流提取效率最高。　　图1对照品及甘草样品的HPLC图（略）　　2.4提取溶剂的选择取同一甘草粉末约0.2g（4份），精密称定，置100ml圆底烧瓶中，分别加入甲醇、70%乙醇、0.5%氨水和70%乙醇（含0.5％氨）各10ml，称定重量，80℃水浴回流2h，取出放冷，补足重量，摇匀，静置。取上清液1ml，置5ml量瓶中，用流动相稀释至刻度。检测方法同上。结果见表1。　　表1提取溶剂的考察（略）　　由表1可以看出，0.5%氨水提取效率最高，故选择氨水作为提取溶剂。　　2.5正交实验

6、结果及分析〔2〕根据初步实验，本文采用氨水浓度（%）、溶剂体积（倍）、回流时间（h）及水浴温度（℃）为考察因素，选用L9(34)正交表安排实验(重复实验2次)。结果见表2～4。　　表2因素水平（略）　　对实验结果进行直观分析，可以得出影响甘草苷提取的因素作用主次为B>D>C>A，方差分析显示因素B有显著影响。通过综合分析，优化后的最佳条件为A2B3C1D2，即用药材250倍体积的0.3%氨水，80℃水浴回流0.5h。　　2.6线性关系的考察精密量取上述对照品溶液适量，配制成系列浓度的对照品溶液2.58，5.17，

7、12.93，25.85，51.70，72.38，93.06μg·ml-1。按上述色谱条件测定甘草苷峰面积。以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，Y=30922326.8637X+29630.7806，r=0.9999。结果表明，甘草苷在0.0258～0.9306μg线性关系良好。　　表3实验结果（略）　　表4方差分析（略）　　2.7精密度实验精密吸取同一对照品溶液(11.76μg·ml-1)10μl，重复进样5次，记录色谱图，以峰面积计算，其RSD为1.15%。　　　　2.8重复性实验精密称取同一甘草粉末

8、样品（6份），按上述方法提取、测定，甘草苷平均含量1.22%，RSD=1.21%。　　2.9加样回收实验取甘草粉末约0.2g(9份)，精密称定，按高、中、低量分别加入甘草苷对照品，再加入0.3%氨水50ml，按照优化条件提取、制备样品，然后按甘草苷