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1、高效液相色谱法同时测定甘草中甘草酸、甘草苷、异甘草素的含量：陈云华,赵晓霞,王文全,段天璇【摘要】目的建立同时测定甘草中甘草酸、甘草苷和异甘草素含量的方法。方法采用高效液相色谱法对甘草粉末的67%甲醇提取物进行分析。用C18反相色谱柱,1%磷酸水-乙腈梯度洗脱,对不同色谱峰分别采用248、276、360、370nm紫外波长检测。结果甘草酸的回归方程为Y＝1×106X＋16220,r2＝1；甘草苷的回归方程为Y＝2×106X＋49444,r2＝0.9995；异甘草素的回归方程为Y＝1×107X＋4.4667,r2＝1。甘草酸、甘草
2、苷和异甘草素的加样回收率分别为98.01%、102.63%、98.18%。结论本方法准确、稳定、可靠,可用于甘草中甘草酸、甘草苷和异甘草素3种成分的同时测定。【关键词】甘草；甘草酸；甘草苷；异甘草素；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveTodevelopaHPLCquantitativelytestmethodofglycyrrhizin,liquiritinandisoliquritigeninsimultaneouslyforlicorice.MethodsThe67%methanolextracts
3、oflicoricepon,usingagradientelutionixtureof1%H3PO4andacetonitrile.TheeluateonitoredbyUVabsorptionat248,276,360and370nm.ResultsThelinearequationofglycyrrhizinethodisaccurate,stableamdreliable,andcanbeusedtodeterminethethreemainchemicalcontentssimultaneously.Keyination
4、在甘草质量研究中,建立稳定可靠的甘草多种成分含量测定非常必要。甘草酸、甘草苷、异甘草素是甘草中代表性成分,甘草酸是皂苷类代表,甘草苷是黄酮类代表,而异甘草素是一种异黄酮类成分。我们此次在以往工作的基础上[1],完善了甘草含量测定方法,使其同时可以对甘草酸、甘草苷、异甘草素进行含量测定。 1仪器与试药Agilent1100型高效液相色谱仪(配有G1314A紫外检测器、1315BDAD检测器、G1311A四元梯度泵、G1322A在线脱气装置、G1316A柱温箱)；Agilent1100化学工作站；SartoriusBS110S1/
5、万、BP211D1/(10万)电子分析天平；KL3120D超声清洗机。甘草GlycyrrhizauralensisFisch.3年生采自甘肃总寨,1～5年生采自内蒙古杭锦旗,由北京中医药大学王文全教授鉴定。60℃干燥过夜并粉碎。甘草酸、甘草苷、异甘草素对照品(批号分别为060520、061009、060801)由上海康九化工公司提供(供含量测定用)。乙腈为色谱纯；水为市售娃哈哈纯净水；甲醇、甲酸、磷酸、冰醋酸为分析纯。 2方法与结果 2.1检测波长的确定分别称取甘草酸、甘草苷、异甘草素对照品适量,分别加甲醇配制成每1mL约含
6、0.1mg的对照品溶液。以甲醇为空白,在波长190～400nm范围内扫描,结果甘草酸的最大吸收波长为248nm和360nm,甘草苷的最大吸收波长为276nm,而异甘草素的最大吸收波长为370nm。 2.2色谱条件色谱柱：AgilentZorbaxExtend分析柱(4.6mm×250mm,5μm)；柱温：25℃；进行梯度洗脱,流动相A为1%磷酸水溶液,流动相B为乙腈；梯度程序、流速及检测波长变化见表1。进样量为10μL。表1流动相梯度条件及检测波长（略） 2.3供试品溶液的制备精密称取甘草粉末(过60目筛,60℃干燥12h)
7、0.1g,置25mL容量瓶中,加入20mL67%甲醇冷浸24h,超声30min,放至室温,加67%甲醇至刻度,摇匀,以0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液即得。 2.4工作曲线称取甘草苷对照品6.28mg、甘草酸对照品5.99mg,分别用甲醇定容于25mL容量瓶中,作为甘草苷和甘草酸对照品储备液。另取异甘草素对照品4.35mg,置25mL容量瓶中,以甲醇溶解并稀释至刻度,再精密吸取0.4mL置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,即得异甘草素储备液。分别精密吸取甘草苷储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL,甘草酸储
8、备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,异甘草素储备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL,置6个10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为系列混合标准溶液。分别进样20μL,记录甘草苷、甘草酸和异甘草素的峰面积。以峰面积对进样量(μ
