抗肿瘤抗体及其靶分子的研究

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1、分类号Q93密级UDC579编号中国科学院研究生院博士学位论文抗肿瘤抗体及其靶分子的研究林芸指导教师阎锡蕴研究员博士中国科学院生物物理研究所申请学位级别博士学科专业名称微生物学论文提交日期2004年9月日论文答辩日期2004年9月日培养单位中国科学院微生物研究所学位授予单位中国科学院研究生院答辩委员会主席林芸博士学位论文2004摘要摘要粘附分子CD146在黑色素瘤的发生、转移过程中十分重要。本实验室发现了CD146分子在肿瘤血管生成中的新功能。第一部分实验以CD146特异性单克隆抗体AA98为工具研究了CD146在血管内皮细胞上的功能，发现：1.CD1

2、46分子参与血管内皮细胞的增殖、迁移，介导肿瘤细胞与血管内皮的粘附，AA98的加入可阻断上述过程；2.CD146参与的信号传导途径证明在内皮细胞和黑色素瘤细胞上，CD146的活化能导致胞内钙库的释放与胞外钙离子内流，说明CD146诱发的信号通路能影响细胞骨架的重排，这可能是AA98抑制肿瘤血管生成的原因。3.与以往报道不同的是，发现内皮细胞同时表达CD146配体并介导内皮与CD146阳性黑色素瘤细胞A375的粘附，CD146与其未知天然配体的相互作用能被AA98部分阻断。以上结果显示CD146与其天然配体的结合在血管内皮细胞的增殖、迁移、信号转导、粘附

3、等血管生成相关过程中发挥重要作用，也是理想的肿瘤血管生成治疗新靶点。在上述研究的基础上，发现CD146分子有进一步应用至肿瘤主动免疫治疗的潜力。对CD146特异性抗体AA98进行改造，其阿霉素偶联物很好的体现了靶向血管的化疗药物特征，基因工程抗体片断VH/L也保持了抗体结合活性和抗血管生成活性，都是值得继续研究开发的肿瘤诊断、治疗制剂。第二部分工作对于一株单克隆抗体T2－2的抗肝癌活性进行了鉴定，发现其在裸鼠肝癌模型中能显著抑制肿瘤的生长，同时在体外抑制肝癌细胞SMMC7721的生长、迁移和对胞外基质蛋白laminin的粘附。流式分析与细胞免疫荧光结果

4、提示T2－2的抗原是骨架相关蛋白，并且与细胞角蛋白的分布类似。由于目前对肝癌的治疗尚缺乏有效手段，该抗体及其抗原有望成为新的抗肝癌制剂以及肿瘤标志分子。第三部分工作利用超高分辨率扫描电镜观察了SARS冠状病毒的表面形态，首次报道其精细三维结构与病毒颗粒表面S蛋白的三聚体结构。与基因分析所得到的病毒表面蛋白结构相互映证，丰富了该病毒的形态学信息，并为SARS防治策略的设计提供有益的启示。关键词：CD146，肿瘤血管生成，抗体，肝癌（HCC），SARS冠状病毒（SARS-CoV）I抗肿瘤抗体及其靶分子研究Anti-tumorantibodiesandthe

5、irantigensYunLin(Microbiology)DirectedbyXiyunYanAbstractAdhesionmoleculeCD146playsakeyroleinmelanomagrowthandprogression.WediscoveredthatCD146alsoinvolvedintumorangiogenesis.FirstpartofthethesesfocusonstudyingthefunctionofCD146onvascularendothelialcellbyusingitsspecificmonoclona

6、lantibodyAA98.Theresultsareoutlinedinseveralpoints:1.CD146playsaroleintheproliferation,migrationofendothelialcellandmediatesadhesionoftumorcellswithvascularendothelium,whichcanbeblockedbyAA98.2.ActivationofCD146triggersthereleaseofintracellularcalciumpoolandextracellularcalciumi

7、nflux,bothonendothelialcellsandmelanomacells,suggestingtheeffectofCD146onrearrangementofcytoskeletonandimpliesthepossiblereasonforAA98inhibitionontumorangiogenesis.3.Differfromtheformerclaimthatendothelialcellsdon’texpressCD146ligand,wefoundCD146anditsnaturalligandbothexpressedo

8、nendothelialcells.TheadhesionofCD146positiveA37