导学案(微生物的实验室培养)

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1、课题1微生物的实验室培养【学习目标】1．说出培养基的类型、用途和基本成分。2．举例说明常用的消毒与灭菌方法。3．阐明培养基配制的方法和接种的方法。重难:培养基的营养成分、无菌操作的基本方法、配制培养基的基本步骤、常用的微生物的接种方法。【自主学习】一基础知识（一）培养基1.概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养物质。2.分类方式分类标准类型备注培养基的培养基、培养基和半固体培养基培养基中加入凝固剂（有琼脂、明胶、硅胶等）即为培养基。培养基是实验室中最常用的培养基之一。微生物的种类细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养培养基的特殊用途基础培养基、

2、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。鉴别培养基：是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。如鉴别大肠杆菌的培养基，鉴别纤维素分解菌的培养基。3.培养基的化学成分包括四类营养成分。除此之外，培养基还要满足微生物生长对、特殊营养物质以及的要求。4.E.coli指。（二）无菌技术1.关键防止的入侵。围绕如何避免杂菌的污染展开。2.无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行；（3）为避免周围微生

3、物污染，实验操作应在旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与相接触。3.比较消毒和灭菌消毒灭菌概念用较的物理或化学方法杀死物体的部分微生物（不包括芽孢和孢子）用较的理化因素杀死物体微生物（包括芽孢和孢子）常用方法消毒法（消毒法）消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、灭菌、灭菌适用对象操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等二实验操作（大肠杆菌的纯化培养）（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：根据比例，计算100mL培养基各成分用量。2.称量：牛肉膏较黏稠，可用玻棒挑取，同一同称量。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。3.溶化：

4、加水加热熔化牛肉膏与称量纸→取出称量纸→加入蛋白胨和氯化钠继续加热→加入→用蒸馏水定容到100mL（整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）。4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用箱灭菌。5.倒平板：待培养基冷却至左右时在附近操作进行。其过程是：①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。（二）纯化大肠杆菌1.方法：微生物接种的最常用方法是和（1）平板划线法

5、：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到的目的。④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3～5条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。⑧将平板倒置放在培养箱中培养。（2）稀释涂

6、布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。①取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。②用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次，使之混匀。③从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。2.培养：将接种后的培养基和一个的培养基都放入恒温箱中，培养12h和24h后喷喷别观察并记录结果。（三）菌种保藏：频繁使用的菌种利用法保存，长期保存菌种的方法是法。【合作探究与

7、展示】1．倒平板的过程中，平板冷凝后为什么要将平板倒置？2．平板划线过程中，为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？3．判断实验操作过程中是否成功的标准？例1.下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（）A.防止杂菌污染B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌D.灭菌必须在接种前变式训练1.将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是()A．对比观察培养基有没有被微生物利用B．对比分析培养基是否被杂菌污染C．没必要放人未接种的培养基D．为了下次接种时再使例2.关微生物营养物质的叙述中，正