[精品]导学案(微生物的实验室培养).doc

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1、课题1微生物的实验室培养【学习目标】1.说出培养基的类型、用途和基木成分。2.举例说明常用的消毒与灭菌方法。3.阐明培养基配制的方法和接种的方法。重难提示：培养基的营养成分、无菌操作的基木方法、配制培养基的基木步骤、常用的微生物的接种方法。【自主学习】一基础知识（―）培养基1•概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养物质。2.分类方式分类标准类型备注培养基的培养基、培养基和半固体培养基培养基屮加入凝固剂（有琼脂、明胶、硅胶等）即为培养基。培养基是实验室屮最常用的培养基微生物的种类细菌培养基、放线菌培养

2、基、酵母菌培养基和霉菌培养培养基的特殊用途基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基选择培养基:允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。鉴别培养基:是在培养基屮加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微牛物。如鉴别大肠杆菌的伊红美蓝培养基，鉴别纤维素分解菌的刚果红培养棊。3.培养基的化学成分包括四类营养成分。除此Z外，培养基还要满足微生物生长对_、特殊营养物质以及—的要求。A.E.coli扌旨o（二）无菌技术1•关键防止的入侵。围绕如何避免杂菌的污染展开

3、。2.无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行:（2）将培养器1111、接种用具和培养基等器具进行:（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在旁进行;（4）避免已灭菌处理的材料用具与相接触。3.比较消毒和灭菌消毒灭菌概念用较的物理或化学方法杀死物体的部分微生物（不包括芽抱和抱子）用较的理化因素杀死物体微生物（包括芽也和砲子）常用方法消毒法（消毒法）消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、灭菌、灭菌适用对象操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃器血、培养基等（一）制备牛肉膏蛋白腺固体培养基1.计算：根据比

4、例，计算lOOmL培养基各成分用量。2.称量：牛肉膏较黏稠，可用玻棒挑取，同一同称量。称取牛肉膏和蛋白H东时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气屮水分。3.溶化：加水加热熔化牛肉膏与称量纸-＞取出称量纸-加入蛋白豚和氯化钠继续加热-加入-用蒸［留水定容到100mL（柴个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）。4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶屮，加塞包扎示用灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用箱灭菌。5.倒平板：待培养基冷却至左右时在附近操作进行。其过稈是：%1在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出

5、棉塞；%1右手拿傩形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；%1左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上血盖。%1待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。（二）纯化大肠杆菌1.方法：微生物接种的最常用方法是半板划线法和稀释涂布法（1）平板划线法：通过接种环在琼脂I占I体培养基表而连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：%1将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。%1在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。%1将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的H的。%1将冷却

6、的接种环伸入到菌液屮取出一环菌种。%1将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。%1将血盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3〜5条平行线,盖上皿盖，不要划破培养基。%1灼烧接种环,冷却示从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。%1将平板倒置放在培养箱屮培养。（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。%1取盛有9mL水的无菌试管6

7、支,编号101、102、103、104、105、106。%1用灼烧冷却的移液管吸取ImL菌液注入编号为101试管屮，并吹打3次，使乙混匀。%1从101倍液屮吸取ImL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。2.培养：将接种后的培养基和一个的培养基都放入恒温箱中，培养12h和24h后喷喷别观察并记录结果。（三）菌种保藏：频繁使用的菌种利用法保存，长期保存菌种的方法是法。【合作探究与展示】1.倒平板的过程屮，平板冷凝后为什么要将平板倒置？1.平板划线过稈中，为什么在操作的第一步以及每次划线之

8、前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.判断实验操作过程屮是否成功的标准?例1.下面对发酵工稈屮灭菌的理解不正确的是（）A.防止杂菌污染B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌D.灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，報个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错谋