肝炎病毒抗原抗体检测的

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1、肝炎病毒抗原抗体检测的原理及检测试剂的选择原则解放军第四七四医院张和平8/10/20211ELISA原理HBsAg:双抗体夹心法HBeAg:双抗体夹心法抗HBs:双抗原夹心法抗Hbe:竞争法抗HBc:竞争法8/10/202121.在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成“夹心复合物”。2.类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，如按常法测定，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hookeffect）3.因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时

2、，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。●双抗体夹心法8/10/20213两对半与美国Abbott试剂的比较河北医学杂志（新）>>2005年第10期总第10期(月刊)>>论著乙型肝炎病毒（HBV）标志物是国内实验室经常检测的项目。两对半试剂生产厂家较多，试剂质量良莠不齐。五家试剂公司分别为英科新创（厦门）科技有限公司、上海荣盛生物技术有限公司、北京万泰生物药业有限公司、珠海丽珠试剂有限公司、深圳月亮湾生物工程有限公司。各厂家质量有较大差异,为了提高乙肝两对半的检验质量，避免误诊、漏诊，以美国Abbott试剂作为参比试剂，

3、对五家公司的两对半试剂的质量进行了对比、评价［4］。8/10/20214两对半与美国Abbott试剂的比较1.本次试验AbbottAxsym系统检测标本中HBsAg结果最高至210S/CO，HBsAb结果最高至6000mIU/mL，HBeAg最高至11600PEIU/mL，以Abbott试剂测定标本的S/CO值为横坐标，五家试剂测定相应标本的OD值为纵坐标，分别绘出了HBsAg、HBsAb及HBeAg的浓度关系图，故在实际应用中的许多一步法试剂仍有HOOK效应存在。对于HBsAg,A、C、D三家试剂存在HOOK效应；

4、对于HBsAb,A试剂存在HOOK效应；对于HBeAg，D试剂存在HOOK效应。此结果可供临床检验部门参考。8/10/20215两对半与美国Abbott试剂的比较1.五家试剂对于HBsAg,HBsAb,HBeAg项目的可检出检测下线分别为5.0S/CO、17mIU/mL、8.5PEIU/mL,2而Abbott试剂的阳性检测下线分别是1.0S/CO、10mIU/mL、0.28PEIU/Ml,说明五家试剂在灵敏度上均低于Abbott试剂,3.国外全自动分析仪系统检测灵敏度，速度，准确性均高于国内试剂。4.各家ELISA试

5、剂的各个检测项目特异性均较好，灵敏度相对较差，尤其是HBeAg，需要提高灵敏度［11］。结果表明除对于HBcAb试剂D的相对灵敏度较差外；其它的各家试剂的各个检测项目的相对灵敏度、相对特异性及总符合率均较好，基本上能满足临床及实验室的要求，此结果可供参考。8/10/20216●双抗体夹心法4.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。6.双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种

6、动物IgG的Fc段结合。8/10/20217双抗体夹心法7.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。8.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标。9.假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，应分别包被固相和制备酶结合物。例如HBsAg的a决定簇，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，8/10/20218双抗原夹心法测抗体1.反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测

7、相应的抗体。2.此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。3.乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。4.本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。8/10/20219竞争法测抗体1.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。2.标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。3.抗HBc.抗Hbe:ELISA一般采用此法。8/10/202110试剂盒选择◎卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使

8、用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。◎灵敏度：1）为试剂检出被检物质的最低量的能力；2）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。3)每一批新试剂应作实验对照8/10/202111血液检测HBsAgELISA阳