肝炎病毒抗原抗体检测的

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1、肝炎病毒抗原抗体检测的 原理及检测试剂的选择原则解放军第四七四医院张和平6/17/20211ELISA原理HBsAg:双抗体夹心法HBeAg:双抗体夹心法抗HBs:双抗原夹心法抗Hbe:竞争法 抗HBc:竞争法6/17/202121.在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成“夹心复合物”。2.类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,如按常法测定,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hookeffect)3.因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩

2、状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。●双抗体夹心法6/17/20213两对半与美国Abbott试剂的比较河北医学杂志(新)>>2005年第10期总第10期(月刊)>>论著乙型肝炎病毒(HBV)标志物是国内实验室经常检测的项目。两对半试剂生产厂家较多,试剂质量良莠不齐。五家试剂公司分别为英科新创(厦门)科技有限公司、上海荣盛生物技术有限公司、北京万泰生物药业有限公司、珠海丽珠试剂有限公司、深圳月亮湾生物工程有限公司。各厂家质量有较大差异,为了提高乙肝两对半的检验质量,避免误诊、漏诊,以美国Abb

3、ott试剂作为参比试剂,对五家公司的两对半试剂的质量进行了对比、评价[4]。6/17/20214两对半与美国Abbott试剂的比较1.本次试验AbbottAxsym系统检测标本中HBsAg结果最高至210S/CO,HBsAb结果最高至6000mIU/mL,HBeAg最高至11600PEIU/mL,以Abbott试剂测定标本的S/CO值为横坐标,五家试剂测定相应标本的OD值为纵坐标,分别绘出了HBsAg、HBsAb及HBeAg的浓度关系图,故在实际应用中的许多一步法试剂仍有HOOK效应存在。对于HBsAg,

4、A、C、D三家试剂存在HOOK效应;对于HBsAb,A试剂存在HOOK效应;对于HBeAg,D试剂存在HOOK效应。此结果可供临床检验部门参考。6/17/20215两对半与美国Abbott试剂的比较1.五家试剂对于HBsAg,HBsAb,HBeAg项目的可检出检测下线分别为5.0S/CO、17mIU/mL、8.5PEIU/mL,2而Abbott试剂的阳性检测下线分别是1.0S/CO、10mIU/mL、0.28PEIU/Ml,说明五家试剂在灵敏度上均低于Abbott试剂,3.国外全自动分析仪系统检测灵敏度,

5、速度,准确性均高于国内试剂。4.各家ELISA试剂的各个检测项目特异性均较好,灵敏度相对较差,尤其是HBeAg,需要提高灵敏度[11]。结果表明除对于HBcAb试剂D的相对灵敏度较差外;其它的各家试剂的各个检测项目的相对灵敏度、相对特异性及总符合率均较好,基本上能满足临床及实验室的要求,此结果可供参考。6/17/20216●双抗体夹心法4.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值。6.双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因

6、子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。6/17/20217双抗体夹心法7.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。8.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标。9.假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,应分别包被固相和制备酶结合物。例如HBsAg的a决定簇,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,6/17/20218双抗原夹心法测抗体1

7、.反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。2.此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。3.乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。4.本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。6/17/20219竞争法测抗体1.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。2.标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。3.抗HBc.抗Hbe:ELISA一般采用此法。6/17/202

8、110试剂盒选择◎卫生部规定乙肝试剂,丙肝试剂,艾滋病试剂,梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格,并贴有防伪标签的产品,试剂应从灵敏度,特异性,精密度,稳定性,简便性,安全性及经济性作出全面的评价。◎灵敏度:1)为试剂检出被检物质的最低量的能力;2)为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力(假阴性越少越好),取决于包被物的全面性。3)每一批新试剂应作实验对照6/17/202111血液检测HBsAgELISA阳

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