丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用价值

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1、丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用价值文章编号：1006-3110(2007)02-0546-02王小卫1,曾立明2,吴口平1摘耍：冃的将HCV核心抗原检测与HCVRNAPCR法和抗・HCV检测进行比较，评估HCV核心抗原检测的临床应用价值。方法采用ELISA法检测121份怀疑为HCV感染患者血清中的HCV核心抗原，并以HCVRNAPCR法和抗・HCV检测结果作为比较。结果121份样本中，PCR法测HCVRNA,阳性56例，阴性65例，ELISA法测HCV核心抗原，阳性52例，阴性69例，ELISA法测抗-HCV,阳性44例，阴性77例；HCVRNAPCR、HCV核心

2、抗原、抗・HCV阳性率分别为46.28%、42.97%、36.36%。同HCVRNAPCR检测结果比较：HCV核心抗原检测符合率90.08%、假阳性率3.31%、假阴性率6.61%；抗・HCV检测符合率81.81%、假阳性率4.13%.假阴性率14.05%。结论HCV核心抗原检测与PCR检测的符合率较高。说明PCR法与HCV核心抗原检测都可以对抗・HCV出现前的感染进行早期诊断，从而缩短窗口期。关键词：HCV核心抗原；HCV-RNA；抗-HCV；窗口期中图分类号：R373.2+1文献标识码：B输血和注射是我国丙型肝炎病毒重要的传播途径，0前采用抗・HCV抗体检测对献血

3、员进行筛查和疾病的诊断，使输血后丙型肝炎的发生率大大降低⑴。但是在HCV感染后至抗・HCV抗体产生Z前有一段长约40-70d的窗口期⑵，此时已具有传染性，但应用目前第三代抗・HCV检测试剂盒无法检出[2],使得在现行的应用抗・HCV来筛选献血员的情况下，还不能完全预防输血后HCV感染的发生。由于在HCV感染后2-5周HCVRNA即可出现在感染者的外周血屮[3],被视为HCV病毒复制的直接标志，可以缩短感染后血清阳转前的检测窗口期，以实现HCV感染的早期诊断。但HCVRNA检测技术对仪器、试剂、实验室条件及实验技巧均有较高的要求，且容易发生交叉污染。HCV核心抗原是由H

4、CV基因中最为保守的部分编码而来，研究表明患者外周血中HCV核心抗原与HCVRNA水平具有良好的相关性[4],在HCVRNA出现后的l~2d内出现，且与HCV作者单位：1湖南省肿瘤医院检验科(湖南长沙410013)；2中南大学湘雅医院作者简介：王小卫(1963-),女，湖南慈利人，本科学历，副主任技师，主耍从事临床检验工作。1RNA的水平相平行，其含量可以作为HCV复制的标志，从而可以作为HCV病毒复制的替代检测标志⑸。本实验采用ELISA法检测HCV核心抗原,并分别与HCVRNAPCR法和抗・HCV检测结果相比较；评估HCV核心抗原检测技术的临床应用价值。现报告如下

5、。1材料与方法1.1标本来源2006年2月110-6月11日，于湘雅医院收集怀疑HCV感染的门诊及住院患者血清标本121份。1.2试剂1.2.1HCV核心抗原检测景达基因有限公司丙型肝炎病毒核心抗原试剂盒。1.2.2HCVRNA检测匹基生物工程股份有限公司HCVRNA荧光定量检测试剂盒。1.2.3抗・HCV检测英科新创科技有限公司丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒。1.3方法1.3.1HCV核心抗原测定先加样品处理液对样品进行预处理30min,将抗原抗体复合物中的结合抗原游离，采用ELISA技术，利用包被在酶标板固相载体上的单克隆抗体捕获待测样本中的HCV抗原，然后加入与包被

6、抗体识别不同抗原表位的酶标记的不同株单克隆抗体检测。利用Bio-TekELX800酶标仪，在450nm波长进行比色，测定各孔的0D值。临界值(CO)二阴性对照平均值+0.06,低于临界值为阴性，高于临界值为阳性。132HCVRNAPCR法检测利用一对丙型肝炎病毒的特异性引物、一个特异性荧光探针，配以RT-PCR反应液，RT-PCR酶、四种核昔酸单体(dNTPs)等成分，采用RT・PCR方法结合荧光探针的扩增检测技术。利用PEGeneAmp5700荧光PCR仪检测变化的荧火信号，以实现对样品中HCVRNA的定量测定。以500IU/ml为检测限，检测限以上为阳性，检测限以

7、下为阴性。1.3.3抗・HCV抗体检测采用间接ELISA方法检测血清或血浆中丙型肝炎病毒的抗体。在微孔中预包被基因表达HCV抗原，与样品中的抗・HCV抗体反应，再加入HRP标记的羊抗人・lgG酶标抗体与之结合，然后加入底物TMB作用显色。利用Bio-TekELX800于450nm波长下进行比色，测各孔0D值，临界值(CO)二阴性对照均值X2.8,样品0D值/C021为阳性，样m0D值/CO<l为阴性。2结果2.1对121份患者血清样本同时检测HCVRNAPCR、HCV核心抗原、抗-HCV2结果见表lo表1121份患者血清HCVRNAPCR、HC