丙型肝炎病毒核心抗原检测在血液筛查中应用

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1、丙型肝炎病毒核心抗原检测在血液筛查中应用【摘要】目的应用丙型病毒性肝炎核心抗原(HCV2cAg)ELISA检测试剂,用于诊断早期丙型肝炎(HCV)病毒标志物。方法78份怀疑为HCV感染患者血清中采用ELISA法检测的HCV核心抗原,并以HCVRNAPCR法和抗-HCV检测结果作为比较。结果78份样本中,PCR法测HCVRNA,阳性36例,阴性42例,ELISA法测HCV核心抗原,阳性34例,阴性44例,RT2PCR荧光定量法测抗-HCV,阳性29例,阴性49例;结论以PCR法测HCVRNA与多种方法检测丙型肝炎病毒核心抗原的临

2、床价值。�【关键词】HCV核心抗原;HCV-RNA;抗-HCV;HCVRT2PCR输血和注射是我国丙型肝炎病毒重要的传播途径,目前采用抗-HCV抗体检测对血液进行筛查和疾病的诊断,使输血后丙型肝炎的发生率大大降低。但是在HCV感染后至抗-HCV抗体产生之前有一段长约40～70d的窗口期,此时已具有传染性,尽管使用的抗2HCVELISA试剂盒均为国家“批批检”合格产品,但由于厂家之间使用HCV基因重组抗原质量及各抗原片段包被比例的不同,各厂家试剂间的灵敏度和特异性存在着一定差异,从而导致抗2HCV5检测结果不一致,易产生假阳性或

3、漏检等情况。由于在HCV感染后2～5周HCVRNA即可出现在感染者的外周血中,被视为HCV病毒复制的直接标志,可以缩短感染后血清阳转前的检测窗口期,以实现HCV感染的早期诊断。本实验采用ELISA法检测HCV核心抗原,并分别与HCVRNAPCR法测抗-HCV检测结果相比较;评估HCV核心抗原检测技术的临床应用价值。现对河南省安阳市中心血站怀疑HCV78份病例进行检测分析报告如下。�1资料与方法�1.1标本来源怀疑HCV感染的门诊及住院患者血清标本78份。�1.2试剂HCV核心抗原检测丙型肝炎病毒核心抗原试剂盒，HCVRNA检测

4、HCVRNA荧光定量检测试剂盒。抗-HCV检测丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒。�1.3主要仪器洗板机(ST236W)和酶标仪(ST2360)均为上海科华实业有限公司生产。PCR扩增仪(LightCycler�)�1.4方法78份血清标本分别用HCV2cAgELISA试剂和HCVRNA荧光定量RT2PCR试剂检测,对其余血清标本仅行荧光定量RT2PCR试剂检测。各种操作方法,结果判断严格按说明书要求。�2结果� 578份样本中,PCR法测HCVRNA,阳性36例,阴性42例,ELISA法测HCV核心抗原,阳性34例,阴性44例,RT

5、2PCR荧光定量法测抗-HCV,阳性29例,阴性49例;HCVRNAPCR、HCV核心抗原、抗-HCV阳性率分别为46.15%、43.58%、37.17%。同HCVRNAPCR检测结果比较:HCV核心抗原检测符合率90.08%、假阳性率3.31%、假阴性率6.61%;抗-HCV检测符合率81.81%、假阳性率4.13%、假阴性率14.05%。�3讨论�PCR法检测的影响因素较多,在样本收集、储存和检测方面都有严格的要求。而且要求昂贵精密的仪器、较高的实验技艺,试剂也比较昂贵,又容易出现交叉污染导致假阳性结果,使得PCR技术的推

6、广受到了极大的限制。目前对丙肝的检测主要为检测抗2HCV和HCVRNA。RT2PCR可定性和定量检测出的HCVRNA,HCV感染后1～13d,应用HCVRNA和RT2PCR即可检测到HCVRNA,2周后可检出HCV2cAg,比抗体检出平均约早30d。所以上述两种方法对HCV感染的早期诊断价值相类似。建立早期简便、敏感、特异的检测丙肝抗原试剂,缩短感染的“窗口期”是降低丙型肝炎感染的有效途径。如果单用第三代抗2HCV试剂A或试剂B检测的阳性标本,再用HCVRNA荧光定量RT2PCR检测阳性率分别为43.58%和37.1%,5其中

7、就可能存在漏检或假阳性。其特异性和灵敏度都比较高,但由于各厂商所用抗原质量和各抗原片段包被比例的不同,因此生产的试剂在灵敏度和特异性方面存在一定差异,从而导致抗2HCV结果的不一致,易产生漏检和假阳性等情况。我国研制抗HCV不同基因区抗体报道较多,亦有实验室对制备的抗体进行双抗体夹心检测HCV抗原。国内外近几年来探索应用HCV2cAg检测HCV的报道较多。结果显示,抗原检测阳性率比文献报道的在抗2HCV阳性标本中HCV2cAg阳性率(34.48%)明显要高。比较而言,HCV2cAgELISA法快速、便捷,较适用于安全输血中献血

8、者的血液筛检。HCV核心抗原检测技术反映了HCV复制的间接指标,且实验方法简便、快捷、价廉,可以在3h内完成,所需设备简单,可进行批量检测。HCV2cAgELISA技术与抗2HCV有互补作用,二者同时检测能提高HCV检出结果的准确性,可明显降低抗2HCV检测的假阳性,减少血液